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翌圣生物科技（上海）股份有限公司
初級(jí)會(huì)員·12年
20121ES60NP-40 Lysis Buffer NP-40裂解液
| 參考價(jià) | ￥228 |
具體成交價(jià)以合同協(xié)議為準(zhǔn)
- 20121ES60 型號(hào)
- Yeasen/翌圣生物 品牌
- 生產(chǎn)商 廠商性質(zhì)
- 上海市 所在地
規(guī)格
| 100 mL | 228元 | 999 件 可售 |
訪問(wèn)次數(shù)：147更新時(shí)間：2024-09-22 10:32:50
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產(chǎn)品簡(jiǎn)介
| 供貨周期 | 現(xiàn)貨 | 應(yīng)用領(lǐng)域 | 醫(yī)療衛(wèi)生,生物產(chǎn)業(yè) |
|---|
產(chǎn)品介紹
產(chǎn)品簡(jiǎn)介
NP-40裂解液(NP-40 Lysis Buffer)是一種比較溫和的細(xì)胞組織裂解液。含有sodium orthovanadate，sodium fluoride，EDTA，leupeptin等多種抑制劑，可以有效抑制蛋白降解。NP-40裂解液裂解得到的蛋白樣品可以用于常規(guī)的PAGE、Western、免疫沉淀(immunol precipitation，IP)、免疫共沉淀(Co-IP)和ELISA等實(shí)驗(yàn)。
產(chǎn)品信息
貨號(hào) | 20121ES60 |
規(guī)格 | 100 mL |
儲(chǔ)存條件
-25~-15℃保存，有效期1年。盡量避免反復(fù)凍融，建議分裝后使用。
使用說(shuō)明
(一) 細(xì)胞樣品
1. 融解NP-40裂解液，混勻。取適當(dāng)量的裂解液，在使用前數(shù)分鐘內(nèi)加入PMSF，使PMSF的最終濃度為1 mM。
2. 貼壁細(xì)胞：去除培養(yǎng)液，用PBS、生理鹽水或無(wú)血清培養(yǎng)液清洗細(xì)胞一遍(如果血清中的蛋白沒(méi)有干擾，可以不洗)。按照6孔板每孔加入150-250 μL裂解液的比例加入裂解液。用槍吹打數(shù)下，使裂解液和細(xì)胞充分接觸。通常裂解液接觸動(dòng)物細(xì)胞1-2秒后，細(xì)胞就會(huì)被裂解。植物細(xì)胞宜在冰上裂解2-10分鐘。
懸浮細(xì)胞：離心收集細(xì)胞，用手指把細(xì)胞用力彈散。按照6孔板每孔細(xì)胞加入150-250 μL裂解液的比例加入裂解液。再用手指輕彈以充分裂解細(xì)胞。充分裂解后應(yīng)沒(méi)有明顯的細(xì)胞沉淀。如果細(xì)胞量較多，必需分裝成5×105-1×106個(gè)細(xì)胞/管，然后再裂解。因?yàn)榇髨F(tuán)的細(xì)胞較難裂解充分，而少量的細(xì)胞由于裂解液容易和細(xì)胞充分接觸，相對(duì)比較容易裂解充分。
充分裂解后，10000-14000 g離心3-5分鐘，取上清，即可進(jìn)行后續(xù)的PAGE、Western和免疫沉淀等操作。
裂解液用量說(shuō)明：通常6孔板每孔細(xì)胞加入150 μL裂解液已經(jīng)足夠，但如果細(xì)胞密度非常高可以適當(dāng)加大裂解液的用量到200 μL 或250 μL。每100萬(wàn)動(dòng)物細(xì)胞用100 μL本產(chǎn)品裂解后獲得的上清，其蛋白濃度約為2-4 mg/ml，不同細(xì)胞有所不同。
（二）組織樣品：
1. 把 切成細(xì)小的碎片。
2. 融解NP-40裂解液，混勻。取適當(dāng)量的裂解液，在使用前數(shù)分鐘內(nèi)加入PMSF，使PMSF的最終濃度為1 mM。
3. 按照每20 mg組織加入150-250 μL裂解液的比例加入裂解液。（如果裂解不充分可以適當(dāng)添加更多的裂解液，如果需要高濃度的蛋白樣品，可以適當(dāng)減少裂解液的用量。）
4. 用玻璃勻漿器勻漿，直至充分裂解。
5. 充分裂解后，10000-14000 g離心3-5分鐘，取上清，即可進(jìn)行后續(xù)的PAGE、Western和免疫沉淀等操作。
6. 如果組織樣品本身非常細(xì)小，可以適當(dāng)剪切后直接加入裂解液裂解，通過(guò)強(qiáng)烈vortex使樣品裂解充分。然后同樣離心取上清，用于后續(xù)實(shí)驗(yàn)。直接裂解的優(yōu)點(diǎn)是比較方便，不必使用勻漿器，缺點(diǎn)是不如使用勻漿器那樣裂解得充分。
注意事項(xiàng)
需自備PMSF(Cat#20104ES)，裂解樣品的所有步驟都需在冰上或4℃進(jìn)行。
用NP-40裂解液裂解得到的蛋白樣品，可以用BCA蛋白濃度測(cè)定試劑盒測(cè)定其蛋白濃度（Cat#20201ES/20200ES）。 由于含有較高濃度的去垢劑，不能用Bradford法測(cè)定由本裂解液裂解得到樣品的蛋白濃度。
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本產(chǎn)品僅作科研用途。
為了您的安全和健康，請(qǐng)穿實(shí)驗(yàn)服并佩戴一次性手套操作。
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