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產(chǎn)品簡介

本試劑盒采用雙抗體一步夾心法酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)（ELISA），用于體外定量檢測大鼠血清、血漿、組織勻漿及相關(guān)液體樣本中載脂蛋白B（ApoB）的含量。需要往預(yù)先包被大鼠載脂蛋白B（ApoB）捕獲抗體的包被微孔中，依次加入標(biāo)本、標(biāo)準(zhǔn)品、HRP標(biāo)記的檢測抗體，經(jīng)過孵育并洗滌。再用底物四甲基聯(lián)苯胺（TMB）顯色，TMB在過氧化物酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍(lán)色，并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成最終的黃色。顏色的深淺和樣品中的大鼠載脂蛋白B（ApoB）呈正相關(guān)，用酶標(biāo)儀在450 nm波長下測定吸光度（OD值），計(jì)算樣品濃度。

翌圣生物提供大鼠載脂蛋白B(ApoB)ELISA試劑盒（60411ES）、小鼠載脂蛋白B(ApoB)ELISA試劑盒（60412ES）和人載脂蛋白B(ApoB)ELISA試劑盒（60413ES）。

產(chǎn)品信息

組分信息

備注：

1）標(biāo)準(zhǔn)品濃度依次為：320、160、80、40、20、10 μg/mL 。

2）已經(jīng)過大量正常標(biāo)本檢驗(yàn)，標(biāo)本的正常濃度值均在試劑盒提供的檢測范圍內(nèi)，實(shí)驗(yàn)過程中直接取50 μL樣本上樣即可。當(dāng)有部分樣本值超過最大標(biāo)準(zhǔn)品濃度時(shí)，可用稀釋液將標(biāo)本進(jìn)行適當(dāng)稀釋后再進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。

儲存條件

2～8℃保存，有效期6個(gè)月。

使用說明

1.樣本處理及要求

1.1血清

將收集于血清分離管的全血標(biāo)本在室溫放置2 h或4℃過夜，然后1000 g離心20 min，取上清即可，或?qū)⑸锨逯糜?20℃或-80℃保存，但應(yīng)避免反復(fù)凍融。

1.2血漿

用EDTA或肝素作為抗凝劑采集標(biāo)本，并將標(biāo)本在采集后的30 min內(nèi)于2～8℃ 1000 g離心15 min，取上清即可檢測，或?qū)⑸锨逯糜?20℃或-80℃保存，但應(yīng)避免反復(fù)凍融。

1.3組織勻漿

用預(yù)冷的PBS (0.01 M, pH 7.4)沖洗組織，去除殘留血液（勻漿中裂解的紅細(xì)胞會影響測量結(jié)果），稱重后剪碎組織。將剪碎的組織與對應(yīng)體積的PBS（一般按1:9的重量體積比，比如1 g的組織樣品對應(yīng)9 mL的PBS，具體體積可根據(jù)實(shí)驗(yàn)需要適當(dāng)調(diào)整，并做好記錄。推薦在PBS中加入蛋白酶抑制劑）加入玻璃勻漿器中，于冰上充分研磨。為了進(jìn)一步裂解組織細(xì)胞，可以對勻漿液進(jìn)行超聲破碎，或反復(fù)凍融。最后將勻漿液于5000 g離心5～10 min，取上清檢測。

1.4細(xì)胞培養(yǎng)物上清或其它生物標(biāo)本

1000 g離心20 min，取上清即可檢測，或?qū)⑸锨逯糜?20℃或-80℃保存，但應(yīng)避免反復(fù)凍融?！咀ⅰ繕?biāo)本溶血會影響最后檢測結(jié)果，因此溶血標(biāo)本不宜進(jìn)行此項(xiàng)檢測。

2.需要的試劑和器材

酶標(biāo)儀（450 nm）、高精度加樣器及槍頭：0.5-10 μL、2-20 μL、20-200 μL、200-1000 μL 、37℃恒溫箱、蒸餾水或去離子水。

3.試劑準(zhǔn)備

所有試劑都必須在使用前達(dá)到室溫，使用后需立即冷藏保存試劑。

20×洗滌緩沖液的稀釋：蒸餾水按1：20稀釋，即1份20×洗滌緩沖液加19份蒸餾水。

4.使用方法

4.1從室溫平衡20 min后從鋁箔袋中取出所需板條，剩余板條用自封袋密封放回4℃。

4.2設(shè)置標(biāo)準(zhǔn)品孔和樣本孔，標(biāo)準(zhǔn)品孔各加不同濃度的標(biāo)準(zhǔn)品 50 μL；

4.3樣本孔中加入待測樣本 50 μL；空白孔不加。

4.4除空白孔外，標(biāo)準(zhǔn)品孔和樣本孔中每孔加入辣根過氧化物酶（HRP）標(biāo)記的檢測抗體100 μL，用封板膜封住反應(yīng)孔，37℃水浴鍋或恒溫箱溫育60 min。

4.5棄去液體，吸水紙上拍干，每孔加滿洗滌液（350 μL），靜置1 min，甩去洗滌液，吸水紙上拍干，如此重復(fù)洗板5次（也可用洗板機(jī)洗板）。

4.6每孔加入底物 A、B各50 μL，37℃避光孵育15 min。

4.7每孔加入終止液 50 μL，15 min內(nèi)，在 450 nm 波長處測定各孔的OD值。

5.實(shí)驗(yàn)結(jié)果計(jì)算

以所測標(biāo)準(zhǔn)品的OD值為橫坐標(biāo)，標(biāo)準(zhǔn)品的濃度值為縱坐標(biāo)，在坐標(biāo)紙上或用相關(guān)軟件繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，并得到直線回歸方程，將樣品的OD值代入方程，計(jì)算出樣品的濃度。

6.試劑盒性能

6.1檢測范圍：10 μg/mL–320 μg/mL。

6.2靈敏度：檢測濃度小于 1.0 μg/mL。

6.3特異性：不與其它可溶性結(jié)構(gòu)類似物交叉反應(yīng)。

6.4重復(fù)性：板內(nèi)變異系數(shù)小于10%，板間變異系數(shù)小于15%。

7.操作總結(jié)

注意事項(xiàng)

1.嚴(yán)格按照規(guī)定的時(shí)間和溫度進(jìn)行溫育以保證準(zhǔn)確結(jié)果，所有試劑都必須在使用前達(dá)到室溫20～25℃，使用后立即冷藏保存試劑。

2.洗板不正確可能會導(dǎo)致不準(zhǔn)確的結(jié)果。在加入底物前確保盡量吸干孔內(nèi)液體，溫育過程中不要讓微孔干燥掉。

3.需要消除板底殘留的液體和手指印，否則影響OD值。

4.底物顯色液應(yīng)呈無色或很淺的顏色，已經(jīng)變藍(lán)的底物液不能使用。

5.避免試劑和標(biāo)本的交叉污染以免造成錯(cuò)誤結(jié)果。

6.在儲存和溫育時(shí)避免強(qiáng)光直接照射。

7.平衡至室溫后再打開密封袋以防水滴凝聚在冷板條上。

8.任何反應(yīng)試劑不能接觸漂白溶劑或漂白溶劑所散發(fā)的強(qiáng)烈氣體，任何漂白成分都會破壞試劑盒中反應(yīng)試劑的生物活性。

9.使用化學(xué)裂解液制備的組織勻漿或細(xì)胞提取液可能會由于某些化學(xué)物質(zhì)的引入導(dǎo)致ELISA實(shí)驗(yàn)結(jié)果偏差。

10.若樣本為細(xì)胞培養(yǎng)上清，因該類樣本干擾因素較多，如：細(xì)胞狀態(tài)、細(xì)胞數(shù)量、采樣時(shí)間等，所以可能存在檢測不出的情況。

11.某些天然蛋白或重組蛋白，包括原核及真核重組蛋白，可能因?yàn)榕c本產(chǎn)品所使用的檢測抗體及捕獲抗體不匹配，而不被檢測出。

12.只有全部使用本試劑盒配套試劑才能保證檢測效果，不能混用其他制造商的產(chǎn)品。

13.為了您的安全和健康，請穿實(shí)驗(yàn)服并戴一次性手套操作。

14.本產(chǎn)品僅作科研用途！

Ver.CN20241217