刀豆蛋白A(Con A)誘導(dǎo)的小鼠肝炎模型

刀豆蛋白A(Con A)是一種被廣泛應(yīng)用可活化 T 細(xì)胞的有絲分裂原，依賴于輔助性T淋巴細(xì)胞(Th)及巨噬細(xì)胞發(fā)揮效應(yīng)，ConA活化T淋巴細(xì)胞，刺激Th細(xì)胞及巨噬細(xì)胞產(chǎn)生TNF -α和IFN Y等細(xì)胞因子。TNF -α可直接損傷肝細(xì)胞，導(dǎo)致肝細(xì)胞凋亡。Con A誘導(dǎo)的小鼠肝損傷實(shí)驗(yàn)動(dòng)物模型， 其病理特點(diǎn)主要是通過(guò)活化 T 淋巴細(xì)胞而致免疫性肝損傷。 Con A 靜脈注射小鼠體內(nèi)后，大部分在肝臟內(nèi)聚集，表明肝臟是Con A 體內(nèi)誘導(dǎo)毒性的靶器官。在病毒性肝炎的炎癥發(fā)生過(guò)程中，淋巴細(xì)胞介導(dǎo)的細(xì)胞毒作用是導(dǎo)致病毒感染肝實(shí)質(zhì)細(xì)胞溶解的主要免疫機(jī)理，而淋巴細(xì)胞與抗原遞呈細(xì)胞及產(chǎn)生抗原的靶細(xì)胞間的粘附，是免疫反應(yīng)過(guò)程所必需的重要步驟.

1.實(shí)驗(yàn)動(dòng)物

SPF級(jí)Balb/C小鼠，雄性，周齡為8w-10w，體重為30g-35g。

2.實(shí)驗(yàn)分組

實(shí)驗(yàn)分六組：正常對(duì)照組、模型組、陽(yáng)性藥組、受試藥組三個(gè)劑量組，每組15只動(dòng)物。

3.主要試劑

刀豆蛋白A

4.實(shí)驗(yàn)周期

    6h

5.建模方法

ConA誘導(dǎo)小鼠肝損傷模型的建立：ConA溶于0.01 mol/L PBS，配成濃度為4mg/ml，以20mg/kg的劑量自小鼠尾靜脈注射1次，在6 h處死小鼠，同時(shí)設(shè)立PBS尾靜脈注射的PBS對(duì)照組。所有小鼠標(biāo)準(zhǔn)飼料飼養(yǎng)， 自由攝食及飲水。

6.模型的評(píng)價(jià)

1. ConA誘導(dǎo)免疫性肝損傷小鼠ALT、AST及MPO的影響：

術(shù)后6h，摘眼球取血，室溫靜止2h， 4℃離心機(jī)3000r/min離心10min，分離出上層血清，置-80℃冰箱保存?zhèn)溆?。與正常組比較，模型組血清ALT、AST及MPO均明顯升高。

2. ConA誘導(dǎo)免疫性肝損傷小鼠肝臟組織學(xué)的影響

取一肝葉，以4%多聚甲醛溶液固定，常規(guī)石蠟包埋切片，觀察病理學(xué)改變。正常組肝小葉結(jié)構(gòu)完整，肝細(xì)胞以中央靜脈為中心呈放射狀排列。模型組肝細(xì)胞索排列紊亂，肝竇淤血較普遍，肝小葉內(nèi)大多數(shù)肝細(xì)胞腫脹，肝組織可見(jiàn)匯管區(qū)纖維間隔形成，可見(jiàn)明顯的點(diǎn)狀壞死和灶狀壞死，壞死灶內(nèi)可見(jiàn)大量中性粒細(xì)胞，淋巴細(xì)胞和單核細(xì)胞浸潤(rùn)，廣泛肝細(xì)胞嗜酸性變、空泡變、脂肪變。

   3. 細(xì)胞因子的檢測(cè)

肝臟損傷后，血清中TNFα、IFNγ、IL-2、IL-6、ICAM1等細(xì)胞因子的表達(dá)顯著升高，可以用ELISA 法檢測(cè)。