猴D型逆轉(zhuǎn)錄病毒RT-PCR試劑盒

Simian Type-D Retrovirus(SRV)

產(chǎn)品及特點

猴 D 型逆轉(zhuǎn)錄病毒(Simian Type D Retrovirus, SRV)會引起猴獲得性免疫 缺陷綜合征，也就是猴艾滋病，該病在非洲的爆發(fā)導(dǎo)致了黑猩猩種群數(shù)量的下降， 患病的黑猩猩有類似晚期人艾滋病患者的器官及組織損壞的癥狀，受感染的黑猩 猩有比未被感染的高 10 至 16 倍的死亡風(fēng)險，被感染的雌性的生育力下降，還可 能將病毒傳給它們的幼兒，這些幼兒死亡率也比未受感染的雌性幼兒更高。該病 毒對人類研究艾滋病毒具有重要意義，為此本公司基于熒光定量 PCR 原理開發(fā)了 本產(chǎn)品。它具有下列特點：

1. 一站式，用于不需要單獨準(zhǔn)備每種成分，包括引物和對照。

2.根據(jù)猴 D 型逆轉(zhuǎn)錄病毒的保守基因序列設(shè)計的引物，具有良好的特異性。

3. 靈敏度可以達(dá)到 1000 拷貝/反應(yīng)。

4. 使用一管式 RT-PCR 技術(shù)，RT 和 PCR 兩步在一個試管內(nèi)完成，不需要中間 轉(zhuǎn)移樣品，降低了操作誤差和可能的污染。

5. 本產(chǎn)品足夠 50 次 20μL 體系的 RT-PCR。

6. 本產(chǎn)品只能用于科研，不能用于臨床。

猴D型逆轉(zhuǎn)錄病毒RT-PCR試劑盒規(guī)格及成分

運輸及保存 低溫運輸，-20℃保存，保存期限為 12 個月。收到貨后陽性對照需要跟其他成分 分開放置，因為其容易污染其他成分，造成假陽性。 

自備試劑 樣品 RNA

使用方法 一、樣品 RNA 的制備

1. 如果有 N 個樣品，必須設(shè)置 N+2 個提取，多出的一個是 PC（樣品制備陽性 對照），一個是 NC（樣品制備陰性對照）?？梢杂?10μL 流行性出血熱病毒 PCR 陽性對照的 100 倍稀釋作為制備的陽性對照；用水作為制備的陰性對照。 制備所得成為樣品 RNA。

2. 用自選方法純化 N+2 個樣品的 RNA，本試劑盒跟市場上大多數(shù)病毒 RNA 提 取試劑盒兼容。

二、設(shè)置 RT-PCR 反應(yīng)（20μL 體系）

3. 如果有 N+2 個樣品，則標(biāo)記 N+4 個 PCR 管（額外增加的兩個管一個是 RT-PCR 陽性對照，另一個是 RT-PCR 陰性對照）并按照下表在 PCR 管中 加入下列成分：

4. 上機(jī)進(jìn)行 RT-PCR，RT-PCR 反應(yīng)參數(shù)為:

5. 瓊脂糖電泳檢測擴(kuò)增效果。如果陰性對照有擴(kuò)增產(chǎn)物或陽性對照無擴(kuò)增產(chǎn)物， 則說明實驗失敗，需要分析實驗失敗的原因。只有在陰性對照沒有擴(kuò)增產(chǎn)物、 陽性對照有 122bp 預(yù)期的擴(kuò)增產(chǎn)物的情況下，才有必要分析樣品的實驗結(jié)果， 如果有擴(kuò)增產(chǎn)物則為陽性，如果無則為陰性。