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上海信裕生物科技有限公司
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當(dāng)前位置:上海信裕生物科技有限公司>>PCR試劑盒>>PCR-染料法>> 50次豬鏈球菌通用染料法熒光定量PCR試劑盒

豬鏈球菌通用染料法熒光定量PCR試劑盒

參   考   價(jià): 2490 2290

訂  貨  量: 1-4  件 ≥5  件

具體成交價(jià)以合同協(xié)議為準(zhǔn)

產(chǎn)品型號(hào)50次

品       牌其他品牌

廠商性質(zhì)生產(chǎn)商

所  在  地上海

更新時(shí)間:2020-08-13 16:00:31瀏覽次數(shù):493次

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供貨周期 一周 規(guī)格 50T
貨號(hào) XY-0697 應(yīng)用領(lǐng)域 醫(yī)療衛(wèi)生,環(huán)保,化工,生物產(chǎn)業(yè),農(nóng)林牧漁
主要用途 熒光定量PCR具有更高的擴(kuò)增效率、更高的擴(kuò)增靈敏度、更高的擴(kuò)增特異性。
豬鏈球菌通用染料法熒光定量PCR試劑盒是群中等小的雙股 DNA 病毒,根據(jù)其理化性質(zhì)分 α、β、γ、未分類皰疹病毒四個(gè)亞科。皰疹病毒感染的宿主范圍廣泛,可感染人類和其他脊椎動(dòng)物。在自然界廣泛存在,主要侵犯外胚層發(fā)育而成的組織,例如:皮膚、粘膜和神經(jīng)組織。

豬鏈球菌通用染料法熒光定量PCR試劑盒

Streptococcus sui

產(chǎn)品及特點(diǎn)

豬鏈球菌?。⊿treptococcus suis)是一種人畜共患的急性、熱性傳染病,急性 型常為出血性敗血癥和腦膜炎,慢性型以關(guān)節(jié)炎、心內(nèi)膜炎、化膿性淋巴結(jié)炎為特征。 豬鏈球菌呈圓形或卵圓形,常呈鏈狀排列,長短不一,是革蘭氏陽性球菌。在血平板 培養(yǎng)基上生長,菌落周圍形成溶血環(huán)?,F(xiàn)已發(fā)現(xiàn)其莢膜抗原血清型有 35 種以上。但 是,并非所有的血清型都有致病性。大多數(shù)致病性血清型在 1-9 血清型。血清型 2 為 見和毒力強(qiáng)的血清型。本公司開發(fā)豬鏈球菌通用染料法熒光定量 PCR 試劑盒, 它具有下列特點(diǎn):

1. 即開即用,用戶只需要提供病毒 DNA 模板。

2. 引物根據(jù)豬鏈球菌通用專一區(qū)設(shè)計(jì),特異性高。

3. 熒光定量 PCR 檢測,比常規(guī) PCR 更加靈敏。

4. 一管式閉管操作,降低了交叉污染。

5. 本試劑盒足夠 50 次 20μL 反應(yīng)體系的熒光定量 PCR。

6. 本產(chǎn)品只適用于科研,不能用于臨床診斷。

豬鏈球菌通用染料法熒光定量PCR試劑盒規(guī)格及成分

編號(hào)

成分

規(guī)格

試劑一

2×PCR MagicMix

500μL(棕色)

試劑二

熒光 PCR 模板稀釋液

1 mL(黃蓋)

試劑三

豬鏈球菌通用染料法 qPCR 引物混 合液

100 μL(白蓋)

試劑四

豬鏈球菌通用染料法 qPCR 陽性對 照(1×10E8 拷貝/μL)

50μL(紅蓋)

試劑五 天凈沙核酸釋放劑試用裝 20 次(1mL,綠蓋))

試劑六

使用手冊

1 份

運(yùn)輸及保存 低溫運(yùn)輸,-20℃保存,保存期限為 12 個(gè)月。

自備試劑   樣品 DNA。

使用方法 一、稀釋 PCR 陽性對照(以 10E2-10E7 拷貝/μL 這 6 個(gè) 10 倍稀釋度為例)

1. 注意:由于陽性對照濃度非常高,因此下列稀釋操作一定要在獨(dú)立的區(qū)域進(jìn)行,千 萬不能污染樣品或本試劑盒的其他成分)。為增加產(chǎn)品穩(wěn)定性和避免擴(kuò)散傳染性病 原,本產(chǎn)品不提供活體樣品做陽性對照,只提供可以直接使用的 DNA 段作為陽 性對照。

2. 標(biāo)記 6 個(gè)離心管,分別為 7,6,5,4,3,2。 3. 用帶芯槍頭分別加入 45 μL 熒光 PCR 模板稀釋液(用帶芯槍頭,下同)。

4. 在 7 號(hào)管中加入 5 μL 1×10E8 拷貝/μL 的陽性對照,充分震蕩 1 分鐘,得 1×10E7 拷貝/μL 的陽性對照。放冰上待用。

5. 換槍頭,在 6 號(hào)管中加入 5 μL 1×10E7 拷貝/μL 的陽性對照(上步稀釋所得), 充分震蕩 1 分鐘,得 1×10E6 拷貝/μL 的陽性對照。放冰上待用。

6. 換槍頭,在 5 號(hào)管中加入 5 μL 1×10E6 拷貝/μL 的陽性對照到 5 號(hào)管中,充分 震蕩 1 分鐘,得 1×10E5 拷貝/μL 的陽性對照。放冰上待用。

7. 重復(fù)上面的操作直到得到 6 個(gè)稀釋度的陽性對照。放冰上待用。

二、樣品 DNA 的制備

8. 如果有 N 個(gè)樣品,必須設(shè)置 N+2 個(gè)提取,多出的一個(gè)是 PC(樣品制備陽性對照), 一個(gè)是 NC(樣品制備陰性對照)??梢杂?10μL PCR 陽性對照的 10000 倍稀釋 的(稀釋后濃度為 1×10E4 拷貝/μL,10μL 相當(dāng)于 1 萬拷貝,可以將 10μL 原 液加入到 990μL 自備 TE 溶液中,充分混勻,此為 100 倍稀釋液。再取 10μL 此 稀釋液加入到 990μL 自備 TE 溶液中,充分混勻,此為 10000 倍稀釋液)再加 上一定量的水作為制備的陽性對照(加水后其總體積跟樣品一樣,樣品體積多少取 決于所用試劑盒的要求)。可以用水作為制備的陰性對照。制備所得成為樣品 DNA。

9. 用自選方法純化 N+2 個(gè)樣品的 DNA,本試劑盒跟市場上大多數(shù)核酸提取試劑盒兼 容。

三、設(shè)置 qPCR 反應(yīng)(20 μL 體系,在樣品制備室進(jìn)行)

10. 如果做定量分析并且只做 1 次重復(fù),則標(biāo)記 N+9 個(gè) PCR 管,其中 N+2 個(gè)用于上 步得到的 N+2 個(gè)樣品,1 個(gè)用于 PCR 陰性對照,6 個(gè)用于標(biāo)準(zhǔn)曲線。如果做定性 分析,并且只做 1 次重復(fù),則標(biāo)記 N+4 個(gè) PCR 管,其中 N+2 個(gè)用于上步得到的 N+2 個(gè)樣品,1 個(gè)用于 PCR 陰性對照(用水做模板),1 個(gè)用于 PCR 陽性對照(如 用第 4 號(hào)陽性對照稀釋液)。下面只描述定量分析的步驟,定性分析只是把 6 個(gè) 標(biāo)曲反應(yīng)縮減成 1 個(gè),其余不變。

11. 在標(biāo)記管中按下表加入各成分(本表只列出一次重復(fù)。樣品管和陰性對照設(shè)置完畢 后才設(shè)置陽性對照,并且陽性對照樣品要等所有管子蓋上蓋子儲(chǔ)存好后后加):

成分

樣品管 N+2 個(gè)

PCR 陰性 對照管

PCR 陽性 對照管(2-7 管)

2×qPCR MagicMix

10 μL

10 μL

各 10 μL

豬鏈球菌通用染料法 qPCR 引物混合液

2 μL

2 μL

各 2 μL

自備 10×ROX (見注)

2 μL

2 μL

各 2 μL

N+2 個(gè)待測樣品 DNA 模板 

6 μL

 

 

第 7 步所得 PCR 陽性對照 稀釋液(2-7 號(hào))

 

 

各 6μL(2 號(hào)樣到 2 號(hào)管,3 號(hào)樣到 3 號(hào)管…)

12. 蓋上蓋子后上機(jī),按下面參數(shù)進(jìn)行 PCR(具體 PCR 參數(shù)可以根據(jù)儀器不同而自行 優(yōu)化)。

過程

溫度

時(shí)間

預(yù)變性

95℃

5 min

 

PCR 反應(yīng)

(40 個(gè)循環(huán)

95℃

15 sec

60℃

1 min,(采集 FAM 通道的熒光信號(hào))

四、數(shù)據(jù)處理

13. 如果把本試劑盒用于定量檢測,則以陽性對照濃度的 log 值為橫軸,以 Ct 值為縱 軸,繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。再以待測樣品的 Ct 值從標(biāo)準(zhǔn)曲線上推算出樣品 cDNA 濃度的 log 值,再推算出其濃度。

14. 如果把本試劑盒用于定性檢測,只判斷陽性或陰性,則陰性對照 Ct 必須大于或等 于 40。陽性對照必須有熒光對數(shù)增長,有典型擴(kuò)增曲線,Ct 值應(yīng)該小于或等于 30。對待測樣品,如果其 Ct 大于或等于 40 則為陰性,如果小于或等于 35 則為 陽性。如果在 35-40 之間,則重復(fù)一次。重復(fù)實(shí)驗(yàn)的 Ct 值如果大于或等于 40 則 為陰性,如果小于 40,則為陽性。

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