生物素衍生物的標記及其產(chǎn)物的檢測原理

一、生物素簡介

生物素（biotin，B）分子量244．31D．生物素分子有兩個環(huán)狀結構，其中Ⅰ環(huán)為咪唑酮環(huán)，是與親和素結合的主要部位；Ⅱ環(huán)為噻吩環(huán)，C2上有一戊酸側鏈，其末端羧基是結合抗體和其他生物大分子的*結構，經(jīng)化學修飾后，生物素可成為帶有多種活性基團的衍生物——活化生物素。

二、生物素衍生物簡介

1、常見的標記方法

★對抗原、抗體標記后活性不變；可對標記材料（如酶）標記，但堿性磷酸酶標記后活性將降低。

2、常見的生物素衍生物結構及其性質

三、生物素標記產(chǎn)物的檢測

1、檢測原理：

親和素（avidin，AV）亦稱抗生物素蛋白、卵白素，是從卵白蛋白中提取的一種由4個相同亞基組成的堿性糖蛋白，分子量為68kD，等電點pI=10.5；耐熱井耐受多種蛋白水解酶的作用．尤其是與生物素結合后，穩(wěn)定性更好。每個親和素能結合4個分子的生物素，二者之間的親和力*，親和素常數(shù)（K）為10^15 l/mol，比抗原與抗體間的親和力（K＝10^5～10^11 L/mol）至少高1萬倍，二者的結合特異性高和穩(wěn)定性好。因此，可以用標記HRP或熒光素的親和素或鏈霉親和素去檢測生物素的標記產(chǎn)物。

2、檢測方法舉例：

1）熒光標記的親和素進行熒光檢測

2）標記親和素-生物素ELISA檢測法（LBA法）

3）橋接親和素-生物素ELISA檢測法（BAB法）

4）親和素-生物素-過氧化物酶復合物ELISA檢測法（ABC法）

5）標記鏈霉親和素-生物素ELISA檢測法（LSAB法）