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上海吉至生化科技有限公司

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RNA 提取和純化基本步驟

2023-10-7 閱讀(296)

通過向樣品中加入硫氰酸胍和還原劑來破壞細胞,然后對其進行劇烈搖晃或渦旋。此步驟還將破壞二硫鍵并使樣品中存在的污染蛋白質失活。
細胞裂解后,需要添加苯酚和氯仿-異戊醇以從溶液中分離 RNA 樣品。水相含有的RNA,因此需要將其放入單獨的試管中,加入異丙醇并離心溶液以沉淀 RNA。

然后用 75% 乙醇洗滌沉淀物,然后去除樣品中的任何雜質。
要注意 RNA 與 DNA 相比不太穩(wěn)定,使用前對其進行分離。在處理之前、期間和之后還應特別小心,以確保樣品的純度。即使是最少量的 RNase 也會影響其質量。
DNA 和 RNA 也可以通過提取總核酸部分并將其分成兩部分從同一生物樣品中分離出來——其中一部分將用 DNase 1 處理,而另一部分將用 RNase A 處理以回收 RNA 和DNA。




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