一、ABI_7500熒光定量PCR儀主要特點(diǎn):
(1)五色熒光檢測,應(yīng)用更廣泛全面,包括:基因表達(dá)分析,病原體定量分析,SNP基因型分析以及以陽性內(nèi)對(duì)照為基礎(chǔ)的陽性/陰性結(jié)果判定。
(2)新型光路設(shè)計(jì)支持更多的熒光標(biāo)記檢測,包括:FAM™/SYBR®GreenI,VIC®/JOE,NED™/TAMRA™/Cy3®,ROX™/TexasRed®,和Cy5®。
(3)更好的激發(fā)光源設(shè)計(jì)使長波長紅色熒光的檢測靈敏度大大提高,強(qiáng)大而靈活的反應(yīng)板設(shè)置指南軟件使反應(yīng)板設(shè)置非常方便,先進(jìn)的實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示與自動(dòng)分析工具使實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)的分析處理更簡單直觀。
(4)新型半導(dǎo)體熱循環(huán)系統(tǒng)支持96孔板和單一0.2ml反應(yīng)管。
(5)將來可以升級(jí)至超速定量PCR反應(yīng)模式,大大縮短定量PCR反應(yīng)時(shí)間體積小,采用手提電腦或臺(tái)式電腦,適用于任何空間的實(shí)驗(yàn)室。
二、ABI_7500熒光定量PCR儀主要應(yīng)用:
(1)實(shí)時(shí)定量PCR應(yīng)用廣泛,包括基于相對(duì)定量分析的基因表達(dá)分析,以標(biāo)準(zhǔn)曲線為基礎(chǔ)的病原體定量分析,定性的PCR擴(kuò)增后核酸序列的SNP基因型分析,以及以陽性內(nèi)對(duì)照為基礎(chǔ)的陽性/陰性結(jié)果判定快速熱循環(huán)
(2)7500型實(shí)時(shí)熒光定量PCR系統(tǒng)的標(biāo)準(zhǔn)模式采用25-100微升反應(yīng)體積,可以采用96孔板或單管/8聯(lián)管進(jìn)行實(shí)驗(yàn)反應(yīng)。
(3)另外7500還可以升級(jí)為快速熱循環(huán)樣品基座,該升級(jí)為選購件,由AB公司工程師負(fù)責(zé)安裝??焖贌嵫h(huán)樣品基座采用新型96孔反應(yīng)板,這種反應(yīng)板的管內(nèi)液體上方的空間較小,可以支持5-30微升反應(yīng)體積的實(shí)驗(yàn)。
(4)采用樣品基座升級(jí)后的7500,新型96孔反應(yīng)板和新型快速熱循環(huán)定量PCR預(yù)混試劑,實(shí)時(shí)定量PCR實(shí)驗(yàn)可以在40分鐘內(nèi)完成,實(shí)驗(yàn)效果與標(biāo)準(zhǔn)2小時(shí)模式**。
三、實(shí)時(shí)定量PCR系統(tǒng)分析軟件:
(1)7500型實(shí)時(shí)熒光定量PCR系統(tǒng)軟件采用WindowsXP®操作系統(tǒng),進(jìn)行儀器控制,數(shù)據(jù)收集和數(shù)據(jù)分析,軟件功能強(qiáng)大,界面友好,包括如下特色:
反應(yīng)板設(shè)置指南,使實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)非常簡單,即使是復(fù)雜的多重定量實(shí)驗(yàn)也是如此。
擴(kuò)增反應(yīng)曲線的實(shí)時(shí)監(jiān)測
自動(dòng)設(shè)定熒光基線,自動(dòng)計(jì)算熒光閾值使實(shí)驗(yàn)結(jié)果分析大大簡化
采用標(biāo)準(zhǔn)曲線進(jìn)行靶基因的定量
基因表達(dá)相對(duì)定量軟件提供強(qiáng)大的結(jié)果分析顯示,可以自動(dòng)將多達(dá)10塊96孔板基因表達(dá)實(shí)驗(yàn)的數(shù)據(jù)同時(shí)分析。
(2)自動(dòng)去除無關(guān)項(xiàng)數(shù)據(jù),該軟件為選購件:
自動(dòng)SNP分型軟件以直觀的圖表輸出分型結(jié)果并自動(dòng)進(jìn)行分型質(zhì)量評(píng)分
解離曲線數(shù)據(jù)采集操作簡單觀察方便,可以在儀器運(yùn)行時(shí)觀察解離曲線數(shù)據(jù)
觀察實(shí)時(shí)擴(kuò)增曲線時(shí)可以非常方便的標(biāo)定所對(duì)應(yīng)的樣品孔位置
光源使用時(shí)間監(jiān)測及儀器系統(tǒng)自我診斷程序
四、熒光信號(hào)檢測:
(1)ABI7500快速型實(shí)時(shí)熒光定量PCR系統(tǒng)的全部96個(gè)樣品孔采用同一鹵鎢燈作為光源,鹵鎢燈光通過五色光源濾光片后激發(fā)每一個(gè)分析樣品。鹵鎢燈光源增加光源濾光片后改善了長波長紅色熒光標(biāo)記的激發(fā)效果,可以大大提高紅色熒光檢測的靈敏度和定量分析的準(zhǔn)確性。
(2)激發(fā)后的熒光再通過五色熒光濾光片到達(dá)CCD照相機(jī)檢測信號(hào)。五色熒光濾光片能夠有效地分辨包括:FAM™/SYBR®GreenI,VIC®/JOE,NED™/TAMRA™/Cy3®,ROX™/TexasRed®和Cy5®在內(nèi)的多種熒光染料。
五、介紹:
(1)ABI7500快速型實(shí)時(shí)定量PCR儀是特異性靶基因檢測與定量的一體化平臺(tái)。7500將PCR熱循環(huán),熒光檢測和各種應(yīng)用分析軟件結(jié)合在一起,可以動(dòng)態(tài)觀察PCR每一循環(huán)各反應(yīng)管中PCR擴(kuò)增產(chǎn)物逐漸增加的情況。
(2)PCR實(shí)驗(yàn)結(jié)束后可以馬上得到定量結(jié)果,無需凝膠電泳分析,無需純化PCR產(chǎn)物,無需進(jìn)行任何實(shí)驗(yàn)操作。
(3)7500型實(shí)時(shí)熒光定量PCR儀采用96孔反應(yīng)板或單個(gè)及8聯(lián)管,反應(yīng)體積25-100微升,實(shí)驗(yàn)可以在不到2小時(shí)內(nèi)結(jié)束。與其他人工基因定量分析方法如NorthernblottingorRNase-protectionassays相比,7500型實(shí)時(shí)熒光定量PCR系統(tǒng)具有時(shí)間省,靈敏度高,準(zhǔn)確性好和線性范圍寬等優(yōu)點(diǎn)。
(4)7500型實(shí)時(shí)熒光定量PCR系統(tǒng)由全球?qū)崟r(shí)定量PCR技術(shù)的美國應(yīng)用生物系統(tǒng)公司于2004年1月推出,它質(zhì)量優(yōu)異,實(shí)驗(yàn)結(jié)果準(zhǔn)確可信,性能價(jià)格比極其*。
六、儀器技術(shù)指標(biāo):
熱循環(huán)系統(tǒng) | 新型半導(dǎo)體,96個(gè)樣品孔,可以升級(jí)到96孔快速熱循環(huán)樣品基座 | |
光學(xué)系統(tǒng) | 5色激發(fā)光源,5色熒光濾光片和超低溫CCD成像系統(tǒng) | |
Run Variables | 標(biāo)準(zhǔn)運(yùn)行模式 | 快速運(yùn)行模式 |
定量PCR運(yùn)行時(shí)間 | 2 小時(shí) | <40分鐘 |
樣品管類型 | 96孔板或0.2-mL單管 | 96孔板 |
反應(yīng)體積 | 25–100 微升 | 5–30微升 |