CAL-62-RFP?細(xì)胞
規(guī)格：70%密度的25cm2培養(yǎng)瓶的細(xì)胞一瓶
特點(diǎn)：細(xì)胞代數(shù)為4代以內(nèi)
包裝：內(nèi)層無菌自封袋；專用防壓泡沫盒；外層防壓保溫氣泡袋；說明書
細(xì)胞來源：ATCC、sciencell、ICLC
貨期：2-3周
運(yùn)輸方式：快遞運(yùn)輸
售后：收到細(xì)胞后7天，如發(fā)現(xiàn)細(xì)胞有質(zhì)量問題（如污染，死亡，快遞運(yùn)輸?shù)仍颍r(shí)，應(yīng)出具書面質(zhì)量問題報(bào)告并及時(shí)聯(lián)系銷售人員，我們將盡快為您解決

CAL-62-RFP?細(xì)胞

1，簽收細(xì)胞后狀態(tài)穩(wěn)定可以先凍存留種
2，傳代當(dāng)天用普通培養(yǎng)基，不要加嘌呤霉素，待細(xì)胞培養(yǎng)1-2天，密度達(dá)到40%后再加
3，階梯式加藥：待到細(xì)胞密度40%以上后，初次加1ug/ml維持觀察2天左右，細(xì)胞狀態(tài)無影響再加到1.5-2ug/ml，觀察2天無影響后，最后加到3ug/ml
4，復(fù)蘇后，待細(xì)胞狀態(tài)穩(wěn)定，密度40%以后，直接加3ug/ml，梯度加藥主要是針對(duì)第一次使用嘌呤霉素的時(shí)候，以免不同實(shí)驗(yàn)室的藥物濃度和活性差異較大，第一次直接使用高濃度把細(xì)胞狀態(tài)弄受損
5，凍存后復(fù)蘇初期，可以用15%血清，讓狀態(tài)盡快穩(wěn)定，然后再降為10%

GFP 和 RFP 分別轉(zhuǎn)染的綠色熒光蛋白和紅色熒光蛋白 直接在熒光顯微鏡下 即可觀察
LUC是螢火蟲熒光素酶 需要加底物（D-熒光素鈉鹽）發(fā)光  激發(fā)和發(fā)射波長分別為328nm和533nM

培養(yǎng)細(xì)胞死亡
1.培養(yǎng)箱內(nèi)無 CO2
建議檢測培養(yǎng)箱內(nèi) CO2
2.培養(yǎng)箱內(nèi)溫度波動(dòng)太大
建議檢查培養(yǎng)箱內(nèi)溫度
3.細(xì)胞凍存或復(fù)蘇過程中損傷
建議取新的保存細(xì)胞種
4.培養(yǎng)液滲透壓不正確
建議檢測培養(yǎng)液滲透壓。注意：大多數(shù)哺乳動(dòng)物細(xì)胞能耐受
滲透壓為 260 – 350 mOsm/kg。加入額外試劑如 HEPES
或藥物都有可能影響培養(yǎng)液滲透壓。
5.培養(yǎng)液種有毒代謝產(chǎn)物堆積
建議換入新鮮培養(yǎng)液

細(xì)胞在培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)至良好狀態(tài)后灌滿*培養(yǎng)液并封好瓶口是細(xì)胞運(yùn)輸?shù)淖詈棉k法。從細(xì)胞資源中心獲得細(xì)胞回到自己的實(shí)驗(yàn)室后，先打開外包裝，用75%酒精噴灑整個(gè)瓶消毒后放到超凈臺(tái)內(nèi)，嚴(yán)格無菌操作。
將細(xì)胞懸液移入離心管，1000rpm/min 離心5分鐘。上清培養(yǎng)液移入無菌瓶中，留待日后培養(yǎng)用。離心下來的細(xì)胞T25瓶中加培養(yǎng)液6-8ml，混勻后放入37℃、5%CO2孵箱培養(yǎng)。
傳代方法：
細(xì)胞生長至1X106/ml時(shí)（一般情況），將細(xì)胞懸液移入離心管800-1000rpm/min離心5分鐘，然后棄上清，加新鮮培養(yǎng)液混勻，1瓶分成3瓶（或6瓶-10瓶），每T25瓶加培養(yǎng)基至6-8ml，37℃、5%CO2孵箱培養(yǎng)