您好, 歡迎來(lái)到化工儀器網(wǎng)
| 供貨周期 | 現(xiàn)貨 | 規(guī)格 | 1 kit |
|---|---|---|---|
| 貨號(hào) | CS-20009-50 | 應(yīng)用領(lǐng)域 | 醫(yī)療衛(wèi)生,化工,生物產(chǎn)業(yè),制藥,綜合 |
產(chǎn)品簡(jiǎn)介
詳細(xì)介紹
一、產(chǎn)品介紹
人中性粒細(xì)胞擴(kuò)增試劑盒是為在體外培養(yǎng)和擴(kuò)增人中性粒細(xì)胞而專門(mén)設(shè)計(jì)的一款含血清培養(yǎng)基套裝。該試劑盒可在21天內(nèi)誘導(dǎo)人CD34+造血干/前體細(xì)胞分化擴(kuò)增為中性粒細(xì)胞，總擴(kuò)增效率達(dá)400-600倍，是研究人中性粒細(xì)胞分化、擴(kuò)增和功能、以及大量產(chǎn)生人中性粒細(xì)胞的重要培養(yǎng)系統(tǒng)。
二、產(chǎn)品特點(diǎn)
針對(duì)人中性粒細(xì)胞的活化和擴(kuò)增而設(shè)計(jì)
三、產(chǎn)品成分
產(chǎn)品名稱 | Catlog# | 規(guī)格 | 儲(chǔ)存條件 |
人中性粒細(xì)胞擴(kuò)增試劑盒 | CS-20009-50 | 1 kit | |
人中性粒細(xì)胞基礎(chǔ)培養(yǎng)基 | CS-20009-B | 50ml | 4℃ |
人中性粒細(xì)胞擴(kuò)增補(bǔ)充因子 | CS-20009-EXS | 0.5ml | -20℃ |
預(yù)篩選中性粒細(xì)胞專用胎牛血清 | CS-NF-5 | 5ml | -20℃ |
其他本試劑盒未提供但需用的重要試劑和組分
人CD34+細(xì)胞磁珠分選試劑
人CD34+造血干/前體細(xì)胞擴(kuò)增試劑盒（東嶺生物，Catalog # CS-20008-50）
四、培養(yǎng)基配制
(在無(wú)菌生物安全柜中，開(kāi)展以下操作)
1.在4℃冰箱解凍補(bǔ)充因子和胎牛血清，混勻后使用。
★注：解凍后的補(bǔ)充因子和血清可放置于4oC冰箱，在1個(gè)月內(nèi)使用；或者分裝至合適體積后，保存于-20℃冰箱，不可反復(fù)凍融！2.擴(kuò)增培養(yǎng)基配制：將1體積的擴(kuò)增補(bǔ)充因子和10體積的血清加入到89體積的基礎(chǔ)培養(yǎng)基中，充分混勻，得到人中性粒細(xì)胞擴(kuò)增培養(yǎng)基。如取100ul補(bǔ)充因子和1ml血清加入至8.9ml基礎(chǔ)培養(yǎng)基，以此類推。
★注：配好的*培養(yǎng)基請(qǐng)于4oC保存，且于1個(gè)月內(nèi)使用完畢。五、使用說(shuō)明
請(qǐng)?jiān)敿?xì)閱讀使用說(shuō)明后再開(kāi)始相關(guān)實(shí)驗(yàn)。
1.D0：使用磁珠分選人CD34+造血干/前體細(xì)胞（參考所使用試劑盒的說(shuō)明書(shū)），計(jì)數(shù)。
★注：G-CSF富集的健康供體每100ml外周血中約含有5*10^5CD34+造血干/前體細(xì)胞。2.按照人CD34+造血干/前體細(xì)胞擴(kuò)增試劑盒（東嶺生物，Catalog # CS-20008-50）說(shuō)明書(shū)配制人CD34+造血干/前體細(xì)胞擴(kuò)增培養(yǎng)基，重懸細(xì)胞，調(diào)整細(xì)胞密度至2.5*10^4/ml，按照如下表格所示將細(xì)胞鋪于培養(yǎng)板：
培養(yǎng)板 | 擴(kuò)增培養(yǎng)基體積 | CD34+造血干/前體細(xì)胞數(shù)/孔 |
96孔板 | 0.2ml | 5*10^3 |
24孔板 | 1.0ml | 2.5*10^4 |
3.將培養(yǎng)板置于細(xì)胞培養(yǎng)箱，37℃，5%CO2，靜置培養(yǎng)。
4.D3：半量換液。小心貼培養(yǎng)板側(cè)壁用槍尖吸走1/2體積舊培養(yǎng)基，補(bǔ)充加入新鮮人CD34+造血干/前體細(xì)胞擴(kuò)增培養(yǎng)基至初始培養(yǎng)體積（步驟2表格）。
★注：*培養(yǎng)基請(qǐng)恢復(fù)至室溫后使用，減少對(duì)細(xì)胞的刺激5.D6：收集細(xì)胞，離心，300g，5分鐘。
6.使用人中性粒細(xì)胞擴(kuò)增*培養(yǎng)基重懸細(xì)胞，調(diào)整密度至5*10^5/ml，將細(xì)胞鋪于合適培養(yǎng)容器中，于細(xì)胞培養(yǎng)箱，37℃，5%CO2，靜置培養(yǎng)。
7.D7-D20：按照需求擴(kuò)增培養(yǎng)人中性粒細(xì)胞，傳代時(shí)細(xì)胞鋪板密度維持在5*10^5/ml，保持培養(yǎng)過(guò)程中細(xì)胞培養(yǎng)密度低于2*10^6/ml.
8.D20：收集懸浮細(xì)胞，即為人中性粒細(xì)胞群體，可根據(jù)需求開(kāi)展后續(xù)實(shí)驗(yàn)。
★注：擴(kuò)增過(guò)程中，密切關(guān)注細(xì)胞擴(kuò)增狀態(tài)，如細(xì)胞密度過(guò)大可能造成細(xì)胞狀態(tài)不可逆損傷及細(xì)胞碎片的增多；D7-D20期間，平均3天傳代一次，可根據(jù)細(xì)胞具體狀態(tài)調(diào)整。
六、數(shù)據(jù)展示
圖：人中性粒細(xì)胞擴(kuò)增培養(yǎng)鑒定。分選人CD34+造血干/前體細(xì)胞按照上述說(shuō)明培養(yǎng)中性粒細(xì)胞，不同時(shí)間點(diǎn)收集細(xì)胞進(jìn)行總細(xì)胞擴(kuò)增分析，培養(yǎng)第20天時(shí)收集懸浮細(xì)胞進(jìn)行表型鑒定及分析。
