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| 供貨周期 | 現(xiàn)貨 | 規(guī)格 | 1 kit |
|---|---|---|---|
| 貨號 | CS-20002-100 | 應(yīng)用領(lǐng)域 | 醫(yī)療衛(wèi)生,化工,生物產(chǎn)業(yè),制藥,綜合 |
產(chǎn)品簡介
詳細介紹
產(chǎn)品介紹
小鼠CD11b+cDC2樹突狀細胞培養(yǎng)試劑盒是為在體外培養(yǎng)和誘導(dǎo)小鼠造血前體細胞向成熟CD11b+cDC2樹突狀細胞（DC）亞群分化發(fā)育而專門設(shè)計的一款含血清培養(yǎng)基套裝。小鼠CD11b+cDC2樹突狀細胞培養(yǎng)試劑盒
產(chǎn)品特點
針對培養(yǎng)小鼠CD11b+cDC2樹突狀細胞而設(shè)計
產(chǎn)品成分
產(chǎn)品名稱 | Catlog# | 規(guī)格 | 儲存條件 |
小鼠 CD11b+cDC2 樹突狀細胞培養(yǎng)試劑盒 | CS-20002-100 | 1 kit | |
小鼠 CD11b+cDC2 樹突狀細胞基礎(chǔ)培養(yǎng)基 | CS-20002-B | 100ml | 4℃ |
小鼠 CD11b+cDC2 樹突狀細胞擴增補充因子 | CS-20002-EXS | 0.35ml | -20℃ |
小鼠 CD11b+cDC2 樹突狀細胞分化補充因子 | CS-20002-DES | 0.65ml | -20℃ |
預(yù)篩選樹突狀細胞專用胎牛血清 | CS-DCF-10 | 10ml | -20℃ |
其他本試劑盒未提供但需用的重要試劑
小鼠 c-kit+ 造血前體細胞磁珠分選試劑
*培養(yǎng)基配制
（在無菌生物安全柜中，開展以下操作）
1.在4℃冰箱解凍補充因子和胎牛血清，混勻后使用。
注：解凍后的補充因子和血清可放置于4℃冰箱，在1個月內(nèi)使用；或者分裝至合適體積后，保存于-20℃冰箱，不可反復(fù)凍融！2.擴增培養(yǎng)基配制：將1體積的擴增補充因子和10體積的血清加入到89體積的基礎(chǔ)培養(yǎng)基中，充分混勻，得到小鼠cDC2樹突狀細胞擴增培養(yǎng)基。如取100ul補充因子和1ml血清加入至8.9ml基礎(chǔ)培養(yǎng)基，以此類推。
分化培養(yǎng)基配制：將1體積的分化補充因子和10體積的血清加入到89體積的基礎(chǔ)培養(yǎng)基中，充分混勻，得到小鼠cDC2樹突狀細胞分化培養(yǎng)基。
注：配好的*培養(yǎng)基請于4℃保存，且于1個月內(nèi)使用完畢。使用說明
(請詳細閱讀使用說明后再開始相關(guān)實驗）
1.使用淋巴細胞分離液從小鼠骨髓總細胞中分離得到骨髓單個核細胞（BM-MNC），計數(shù)。
2.使用磁珠分選BM-MNC中c-kit+造血前體細胞（參考所使用試劑盒的說明書），計數(shù).
注：一只小鼠骨髓中約含有1.5*10^6 c-kit+造血前體細胞，可根據(jù)需要調(diào)整進入分選的BM-MNC細胞量。3.D0：使用擴增培養(yǎng)基重懸BM-MNC，調(diào)整細胞密度至2.5*10^4/ml，按照如下表格所示將細胞鋪于培養(yǎng)板：
| 培養(yǎng)板 | 擴增培養(yǎng)基體積 | CD34+造血干/前體細胞數(shù)/孔 |
24孔板 | 1.0ml | 2.5*10^4 |
6孔板 | 4.0ml | 1*10^5 |
4.將培養(yǎng)板置于細胞培養(yǎng)箱，37℃，5%CO2，靜置培養(yǎng)。
5.D3：擴孔。輕輕吹打孔內(nèi)細胞及培養(yǎng)基，按照1:3將原孔內(nèi)懸浮細胞平均分至3個新孔中，同時補加新鮮擴增培養(yǎng)基至初始培養(yǎng)體積（步驟3表格）。
注：*培養(yǎng)基請恢復(fù)至室溫后使用，減少對細胞的刺激6.D6：1)擴孔：輕輕吹打孔內(nèi)細胞及培養(yǎng)基，按照1:2將原孔內(nèi)懸浮細胞平均分至2個新孔中；
2)誘導(dǎo)分化：在每個新孔內(nèi)，補加等量分化培養(yǎng)基；
注：由于培養(yǎng)過程中培養(yǎng)基的揮發(fā)造成體積損失，該步驟加入分化培養(yǎng)基時可按照24孔板每孔加入0.5ml或6孔板每孔加入2ml分化培養(yǎng)基計算。D6時培養(yǎng)板底會有一定量貼壁細胞出現(xiàn)，擴孔時請輕輕吹打細胞，只將懸浮細胞轉(zhuǎn)移至新孔。貼壁細胞多為巨噬細胞，會影響最終DC純度。7.D8：1)小心貼培養(yǎng)板側(cè)壁用槍尖吸走1/2體積舊培養(yǎng)基；
2)轉(zhuǎn)孔：輕輕吹打細胞，收集懸浮細胞，按照1:1將原孔內(nèi)懸浮細胞轉(zhuǎn)移至新孔中。補充 新鮮分化培養(yǎng)基至初始體積（步驟3表格）。
8.D10：輕輕吹打細胞，收集懸浮細胞，即為分化成熟的小鼠cDC2，可進行后續(xù)操作和分析。
注：如需研究特定刺激對DC 的影響，可提前加入相應(yīng)刺激，待D10收集細胞進行分析。常見問題及提示
培養(yǎng)過程中，隨著培養(yǎng)時間的延長，有越來越多的細胞出現(xiàn)貼壁屬于正?，F(xiàn)象，收集細胞操作時，請輕輕混勻后收取懸浮細胞進行后續(xù)分析，棄掉牢固貼壁的細胞（多為巨噬細胞）。
此系統(tǒng)培養(yǎng)出的總細胞，其中cDC2樹突狀細胞占總細胞比例應(yīng)為80-95%范圍內(nèi)。
數(shù)據(jù)展示
圖：小鼠CD11b+cDC2樹突狀細胞鑒定。取4-6周齡雄性C57BL/6小鼠按照上述說明培養(yǎng)CD11b+cDC2至第10天，收集懸浮細胞檢測DC產(chǎn)生和亞群分布。
