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目錄:北京蘭博利德商貿(mào)有限公司>>分子生物學(xué)試劑>>qPCR相關(guān)>> R02122x示蹤型定量試劑盒

2x示蹤型定量試劑盒
  • 2x示蹤型定量試劑盒
參考價200-2800
具體成交價以合同協(xié)議為準(zhǔn)

參考價:¥200 ~ ¥2800

具體成交價以合同協(xié)議為準(zhǔn)
  • LABLEAD 品牌
  • R0212 型號
  • 代理商 廠商性質(zhì)
  • 北京市 所在地
規(guī)格

125次(1.25 ml) 500次(4*1.25 ml) 1000次(8*1.25ml) >

屬性

供貨周期:一周 貨號:R0212

>
規(guī)格
125次(1.25 ml)200元99999件可售
500次(4*1.25 ml)750元99999件可售
1000次(8*1.25ml)1350元99999件可售

更新時間:2024-12-10 08:54:32瀏覽次數(shù):199評價

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供貨周期 一周 貨號 R0212
2x Visual Realab Green PCR Fast mixture通用型(2x示蹤型定量試劑盒)是SYBR Green l嵌合染料法專用 qPCR 試劑,為2x預(yù)混液,包含除引物和 DNA 樣品以外的所有 qPCR 組分,可減少操作步驟,縮短加樣時間,降低污染幾率。其核心組分是經(jīng)抗體修飾的熱啟動 Tag DNA 聚合酶,配合精心優(yōu)化的 Buffer 體系以及 PCR 反應(yīng)促進(jìn)因

2x示蹤型定量試劑盒


貨號:R0212

儲存條件:長期保存請于 -20℃避光保存,解凍后可在 4℃避光條件下穩(wěn)定存放一個月,盡量避免反復(fù)凍融。

產(chǎn)品組分:

組分

貨號

500T

1000T

2500T

2x Visual SYBR qPCR mixture Universal

R0212-A

4*1.25ml

8*1.25ml

20*1.25ml

10× Dilution Buffer

R0212-B

1ml

2*1ml

5*1ml










產(chǎn)品描述

2x Visual Realab Green PCR Fast mixture通用型(示蹤型定量試劑盒)是SYBR Green l嵌合染料法專用 qPCR 試劑,為2x預(yù)混液,包含除引物和 DNA 樣品以外的所有 qPCR 組分,可減少操作步驟,縮短加樣時間,降低污染幾率。其核心組分是經(jīng)抗體修飾的熱啟動 Tag DNA 聚合酶,配合精心優(yōu)化的 Buffer 體系以及 PCR 反應(yīng)促進(jìn)因子,特異性強(qiáng)、擴(kuò)增效率高,可有效抑制非特異性擴(kuò)增,對寬廣濃度范圍的模板進(jìn)行準(zhǔn)確定量,獲得穩(wěn)定可靠的 qPCR結(jié)果。本品已含有通用校正染料,與絕大多數(shù) qPCR 設(shè)備兼容,不需要額外添加染料來校正儀器。

本品可利用不同染料混合后產(chǎn)生的變色效應(yīng),追蹤移液過程,從而顯著減少移液錯誤。2x Visual Realab Green PCR Fast mixture通用型中包含藍(lán)色染料,10x Dilution Buffer 中包含黃色染料。當(dāng) 2x Visual Realab Green PCR Fast mixture通用型(藍(lán)色)中加入了用 Dilution Buffer稀釋的模板(黃色)后會產(chǎn)生藍(lán)色→綠色的變色效應(yīng),從而可以根據(jù)液體顏色準(zhǔn)確判斷是否已加入模板。


使用方法:

1. 模板稀釋

使用過程中,如需要進(jìn)行移液追蹤,則根據(jù)下表選擇合適的方式提前添加 Dilution Buffer 至模板中,然后進(jìn)行 qPCR 檢測;如不需要進(jìn)行移液追蹤,則不使用 Dilution Buffer 即可。

DNA 模板狀態(tài)

10× Dilution Buffer 使用方式

模版中Dilution Buffer 濃度

固體

使用 ddH,0 將 10x Dilution Buffer 稀釋至 1x,使用 1xDilution Buffer溶解 DNA

1x

液體

如有必要,先使用 ddH20 將模板稀釋至目標(biāo)濃度,然后在每 9μl模板中加入 1ul 10x Dilution Buffer

1x






建議的 qPCR 反應(yīng)體系

試劑

使用量

終濃度

2x Visual SYBR qPCR mixture Universal

10ul

1 x

正向引物(10uM)a

0.4ul


反向引物(10uM)a

0.4ul


DNA模版b

X ul


Nuclease-Free Water

To 20ul













a. 通常推薦的引物終濃度為 0.2 μM,可在 0.1~1 μM 范圍內(nèi)調(diào)整;

b. 如使用 Dilution Buffer 進(jìn)行加樣追蹤,模板體積請勿超出2~5μl/20 μl reaction。

如果模板用量低于 2 μl/20 μl reaction,會造成顯色偏淡,影響追蹤效果;如果模板用量高于 5 μl/20 μl reaction,Dilution Buffer 中的成分可能會干擾 qPCR 反應(yīng)。不同種類 DNA 模板中含有的靶基因拷貝數(shù)目不同,必要時可進(jìn)行梯度稀釋,以確定最佳的 DNA 模板添加量。

注:當(dāng)模板類型為未稀釋 cDNA 原液時,不論其是否包含 1× Dilution Buffer,使用體積均不應(yīng)超過 qPCR 反應(yīng)總體積的 1/10,即 2 μl/20 μl reaction。


3. qPCR 反應(yīng)程序(可根據(jù)機(jī)型適當(dāng)調(diào)整)

兩步法

步驟

溫度

時間

循環(huán)

預(yù)變性

95℃

30s


變性

95℃

10s

40cycles

退火 & 延伸a

60℃

30s

溶解曲線

使用儀器默認(rèn)采集程序









三步法

步驟

溫度

時間

循環(huán)

預(yù)變性

95℃

30s


變性

95℃

10s

40 cycles

退火a

55~65℃

10s

延伸a

72℃

30s

溶解曲線

使用儀器默認(rèn)采集程序










a.根據(jù)引物的 Tm 值進(jìn)行退火&延伸(退火)溫度的設(shè)定;若擴(kuò)增片段在 200bp 以內(nèi),退火 &延伸(延伸)時間可以設(shè)置為 15 s;此外,退火&延伸(延伸)時間的設(shè)置還需根據(jù)您使用的 qPCR 儀所需要的最短數(shù)據(jù)采集時間自行調(diào)整。



4.實(shí)驗優(yōu)化

① 引物濃度調(diào)整

當(dāng)引物終濃度在 0.1~1.0 μM 范圍之間變化時,引物濃度越低,擴(kuò)增特異性越高,但擴(kuò)增效率會有所下降。

② 擴(kuò)增程序優(yōu)化

需提高擴(kuò)增特異性,可使用兩步法程序或提高退火溫度;需提高擴(kuò)增效率,可使用三步法程序或延長延伸時間。


5.引物設(shè)計原則

① 擴(kuò)增產(chǎn)物長度建議控制在 80~200 bp;

② 引物長度為 18~25 bp;

③ 兩條 Tm 值相差不超過 1℃,Tm 值控制在 58~62℃;

④ 引物的 GC 含量控制在 40%~60%;

⑤ 引物 A、G、C、T 整體分布盡量要均勻,避開 T/C 或者 A/G 的連續(xù)結(jié)構(gòu)(特別是 3' 端),3' 端最后一個堿基最好為 G 或者 C;

⑥ 避開引物內(nèi)部或者兩條引物之間的互補(bǔ)序列;

⑦ 使用 NCBI BLAST功能檢索確認(rèn)引物的特異性。








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