AAT Bioquest 16350  Cell Meter™ 熒光細(xì)胞內(nèi)一氧化氮 （NO） 活性檢測試劑盒

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AAT Bioquest 熒光一氧化氮活性檢測試劑盒-常備現(xiàn)貨

美國AAT Bioquest Inc.(前身是ABD Bioquest，Inc.)是一家為從事生命科學(xué)研究、診斷研發(fā)及藥物開發(fā)的科學(xué)家研發(fā)、生產(chǎn)和銷售生物分析研究試劑和試劑盒的公司。公司致力于光譜學(xué)檢測領(lǐng)域，包括吸收（顏色），熒光和發(fā)光技術(shù)。AAT Bioquest的產(chǎn)品幫助 quan 世 jie 的科學(xué)家和生物醫(yī)藥研究者更好的了解生物化學(xué)，免疫學(xué)，細(xì)胞生物學(xué)和分子生物學(xué)等領(lǐng)域。AAT Bioquest會不斷介紹新產(chǎn)品，快速的豐富各個領(lǐng)域的產(chǎn)品。

AAT Bioquest 16350 Cell Meter™ 熒光細(xì)胞內(nèi)一氧化氮 （NO） 活性檢測試劑盒 *針對酶標(biāo)儀優(yōu)化的橙色熒光*  200 Tests，產(chǎn)品簡介：

產(chǎn)品品牌：AAT Bioquest

產(chǎn)品貨號：16350

產(chǎn)品名稱：Cell Meter™ 熒光細(xì)胞內(nèi)一氧化氮 （NO） 活性檢測試劑盒

產(chǎn)品規(guī)格：200 Tests

AAT Bioquest 熒光一氧化氮活性檢測試劑盒-常備現(xiàn)貨 

AAT Bioquest 16350 Cell Meter™ 熒光細(xì)胞內(nèi)一氧化氮 （NO） 活性檢測試劑盒 *針對酶標(biāo)儀優(yōu)化的橙色熒光*  200 Tests，產(chǎn)品說明：

一氧化氮（NO）是一種重要的生物調(diào)節(jié)因子，參與許多生理和病理過程。NO生成改變與各種免疫，心血管，神經(jīng)退行性和炎癥性疾病有關(guān)。作為一種自由基，NO被迅速氧化，體內(nèi)存在的NO濃度相對較低。檢測和理解NO在生物系統(tǒng)中的作用一直具有挑戰(zhàn)性。細(xì)胞計(jì)™熒光法細(xì)胞內(nèi)一氧化 dab 檢測試劑盒提供了一種靈敏的工具，用于監(jiān)測活細(xì)胞中的細(xì)胞內(nèi)NO水平。我們的試劑盒中開發(fā)并使用了硝酸™探針，作為DAF-2的  jue jia 替代品，用于檢測和成像細(xì)胞中的游離NO。與常用的DAF-2探針相比，硝酸™探針具有更好的光穩(wěn)定性和增強(qiáng)的細(xì)胞通透性。該特定試劑盒使用硝 suan ™橙，可以與NO反應(yīng)產(chǎn)生明亮的橙色熒光產(chǎn)物，其光譜特性類似于Cy3®和TRITC。亞硝 suan ™橙可以很容易地加載到活細(xì)胞中，并且可以使用Cy3®或TRITC的濾光片組方便地監(jiān)測其熒光信號。該試劑盒針對熒光成像和酶標(biāo)儀應(yīng)用進(jìn)行了優(yōu)化。

平臺

熒光酶標(biāo)儀

Excitation：540 納米

Emission：590 納米

近路：570 納米

推薦板：黑色墻壁/透明底部

儀器規(guī)格：底部讀取模式

組件

組分A：500X亞硝酸™橙 1 瓶 （50 μL）

組分B：檢測緩沖液I 1 瓶 （20 mL）

組分C：檢測緩沖液II     1 瓶 （20 mL）

1. 在生長培養(yǎng)基中制備細(xì)胞

2. 用測試化合物和硝酸™橙工作溶液在37孵育細(xì)胞oC 表示所需時(shí)間段

3. 添加檢測緩沖液II

4. 在Ex / Em = 540/590 nm（截止= 570 nm）或使用TRITC濾光片監(jiān)測熒光顯微鏡下監(jiān)測熒光強(qiáng)度（底部讀取模式）

重要說明：在開始實(shí)驗(yàn)之前，在室溫下解凍所有試劑盒成分。

工作溶液的制備

將 20 μL 500X 亞硝酸橙儲備溶液（組分 A）加入 10 mL 檢測緩沖液 I（組分 B）中，充分混合制成硝酸™™橙工作溶液。這種硝酸™橙工作溶液在室溫下至少可穩(wěn)定保存 2 小時(shí)。避光。注意：20 μL 500X 亞硝™酸橙儲備溶液足以用于一個板。

實(shí)驗(yàn)方案樣本

1. 為了刺激內(nèi)源性NO，在細(xì)胞培養(yǎng)基或所需的緩沖液（如PBS或HHBS）中用10 μL 10X測試化合物（96孔板）或5 μL 5X測試化合物（384孔板）處理細(xì)胞。對于對照孔（未處理的細(xì)胞），加入相應(yīng)量的培養(yǎng)基或復(fù)合緩沖液。注意：在添加化合物之前不需要清洗細(xì)胞。但是，如果測試化合物對血清敏感，則可以在添加化合物之前吸走生長培養(yǎng)基和血清因子。抽吸后加入 90 μL/孔（96 孔板）和 20 μL/孔（384 孔板）的 1X Hank 鹽溶液和 20 mM Hepes 緩沖液 （HHBS） 或您選擇的緩沖液。或者，細(xì)胞可以在無血清培養(yǎng)基中生長。

2. 在細(xì)胞板中加入 100 μL/孔（96 孔板）或 25 μL/孔（384 孔板）的亞硝酸™橙工作溶液。將細(xì)胞與測試化合物和硝酸™橙工作溶液在 37°C 下共孵育所需的時(shí)間，避光。注意：請勿去除測試化合物。對于NONOate陽性對照處理：將細(xì)胞與硝酸™橙工作溶液在37°C下孵育30分鐘。除去工作溶液，并將細(xì)胞進(jìn)一步與1mM DEA / NONOate在37°C下孵育30分鐘以產(chǎn)生一氧化氮。注意：我們使用 Raw 264.7 細(xì)胞在 0°C 的細(xì)胞培養(yǎng)基中與 5.20X 硝酸™橙、1 μg/mL 脂多糖 （LPS） 和 37 mM L-精an酸 （L-Arg） 一起孵育 16 小時(shí)。有關(guān)詳細(xì)信息，請參見圖 1。

3. 去除每個孔中的溶液。

4. 對于100孔板，添加96μL/孔的測定緩沖液II（組分C）或?qū)τ?span>25孔板的384μL/孔。注意：添加檢測緩沖液II前不要洗滌細(xì)胞。

5. 使用酶標(biāo)儀在Ex / Em = 540 / 590nm（截止= 570nm）下以底部讀取模式監(jiān)測熒光增加，或使用帶有TRITC濾光片的熒光顯微鏡拍攝圖像。

產(chǎn)品訂購信息：

16350 Cell Meter™ 熒光細(xì)胞內(nèi)一氧化氮 （NO） 活性檢測試劑盒 *針對酶標(biāo)儀優(yōu)化的橙色熒光*  200 Tests