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基因分析儀通常稱為測序儀，主要是因為它們被用于Sanger測序。但對于這一廣泛的DNA測序技術(shù)，您可能不知道的是，您的基因分析儀也可以用于測定DNA片段的大小，稱為“片段分析"。這是指一種廣泛應(yīng)用的遺傳分析技術(shù)，適用于突變檢測、基因分型、DNA圖譜測定、遺傳譜系繪制以及連鎖分析等應(yīng)用。

Wow，原來它的原理so easy！

在大多數(shù)片段分析應(yīng)用中，待分析的未知DNA片段使用熒光標(biāo)記的引物，通過PCR生成熒光標(biāo)記的PCR產(chǎn)物并與分子量標(biāo)準(zhǔn)品混合。分子量標(biāo)準(zhǔn)品是使用與未知片段不同的熒光染料標(biāo)記的已知大小的DNA片段混合物。

 

隨后，使用熱循環(huán)儀對該樣品進(jìn)行變性處理，我們推薦使用“Veriti"熱循環(huán)儀，再將樣品放在基因分析儀中進(jìn)行分析。當(dāng)已知和未知的DNA片段混合物進(jìn)樣到基因分析儀中，在毛細(xì)管遷移時會根據(jù)片段大小進(jìn)行分離，較小的片段移動較快，而較大的片段移動較慢。

 

系統(tǒng)照相機(jī)根據(jù)所使用的染料對每個標(biāo)記片段進(jìn)行檢測，所產(chǎn)生的熒光信號會生成一個峰，然后，使用GeneMapper軟件分析電泳圖中的峰。根據(jù)分子量標(biāo)記物中每個已知DNA片段的分子量及其對應(yīng)的遷移時間，生成分子量標(biāo)準(zhǔn)曲線，該曲線可用于精確確定未知片段的大小。

 

它的優(yōu)勢，您get了嗎？

基因分析儀進(jìn)行片段分析的一個非常大的優(yōu)勢，是它的多重分析能力。當(dāng)您想要分析不同大小范圍的DNA片段時，這些片段可用相同的染料標(biāo)記并在毛細(xì)管中進(jìn)行分離。然后再進(jìn)行單獨檢測，這些都沒有問題。但是當(dāng)片段的分子量范圍重疊或者部分重疊時，您將無法分辨哪個峰對應(yīng)哪個片段，這就需要熒光多重分析能力。使用基因分析儀可以同時檢測多個染料。因此，您可以使用不用染料標(biāo)記大小范圍相近的DNA片段。這些片段大小和熒光標(biāo)記組合實現(xiàn)高水平的多重化，使您能夠在單次遷移中分析多個片段。

使用基因分析儀進(jìn)行片段分析的另一個優(yōu)勢，在于可實現(xiàn)的靈敏度。且不說您可以使用任何類型的DNA模板，您甚至可以使用血斑或者FFPE這樣難分析的樣品。與測序不同，大部分片段分析應(yīng)用不需要在電泳前進(jìn)行復(fù)雜的樣品制備和純化。而且，由于根據(jù)分子量大小進(jìn)行結(jié)果確定，所以數(shù)據(jù)解讀非常簡單。您可以在基因分析儀上運行多種片段分析應(yīng)用，并且不需要預(yù)先知道DNA序列。您還可以在相關(guān)定量應(yīng)用中使用峰強(qiáng)度測量。

您只需要加入一點創(chuàng)造力，就可以隨時開發(fā)一款自定義片段分析應(yīng)用。