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北京諾博萊德科技有限公司
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當(dāng)前位置:北京諾博萊德科技有限公司>>生化試劑>>輔酶Ⅰ系列>> BE6007輔酶ⅡNADP(H)含量測(cè)定試劑盒分光光度法

輔酶ⅡNADP(H)含量測(cè)定試劑盒分光光度法

參  考  價(jià)面議
具體成交價(jià)以合同協(xié)議為準(zhǔn)

產(chǎn)品型號(hào)BE6007

品       牌NobleRyder/諾博萊德

廠商性質(zhì)生產(chǎn)商

所  在  地北京市

更新時(shí)間:2025-03-31 11:09:24瀏覽次數(shù):69次

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供貨周期 現(xiàn)貨 規(guī)格 25T/12S / 50T/24S
貨號(hào) BE6007 應(yīng)用領(lǐng)域 環(huán)保,化工,生物產(chǎn)業(yè),農(nóng)林牧漁,制藥/生物制藥
主要用途 是三羧酸循環(huán)第一個(gè)限速酶,是三羧酸循環(huán)主要調(diào)控位點(diǎn)之一
CS(EC 2.3.3.1)廣泛存在于動(dòng)物、植物、微生物和培養(yǎng)細(xì)胞的線粒體基質(zhì)中,是三羧酸循環(huán)第一個(gè)限速酶,是三羧酸循環(huán)主要調(diào)控位點(diǎn)之一。
輔酶ⅡNADP(H)含量測(cè)定試劑盒分光光度法

輔酶ⅡNADP(H)含量測(cè)定試劑盒(分光光度法

分光光度法

輔酶ⅡNADP(H)含量測(cè)定試劑盒分光光度法

正式測(cè)定前務(wù)必取 2-3 個(gè)預(yù)期差異較大的樣本做預(yù)測(cè)定測(cè)定意義:

CS(EC 2.3.3.1)廣泛存在于動(dòng)物、植物、微生物和培養(yǎng)細(xì)胞的線粒體基質(zhì)中,是三羧酸循環(huán)第一個(gè)限速酶,是三羧酸循環(huán)主要調(diào)控位點(diǎn)之一。

測(cè)定原理:

CS 催化乙酰CoA 和草酰乙酸產(chǎn)生檸檬酰輔mei A,進(jìn)一步水解產(chǎn)生檸檬酸;該反應(yīng)促使無(wú)色的DTNB轉(zhuǎn)變成黃色的TNB,在 412nm 處有特征吸光值。

組成:

產(chǎn)品名稱

BE6007-25T/12S

BE6007-50T/24S

Storage

試劑一:液體

25ml

50ml

20℃

試劑二:液體

5ml

10ml

-20℃

試劑三:液體

0.5ml

1ml

-20℃

試劑四:液體

28ml

55ml

4℃

試劑五:粉劑

1  

1

4℃

試劑六:粉劑

1  

1

-20℃

說(shuō)明書(shū)


一份






CE009-25T/12S 試劑六:粉劑×1 支,-20℃保存,臨用前加入 1.2ml 蒸餾水,用不完的試劑仍-20℃保存;

CE009-50T/24S 試劑六:粉劑×1 支,-20℃保存,臨用前加入 2.4ml 蒸餾水,用不完的試劑仍-20℃保存;

自備儀器和用品:

可見(jiàn)分光光度計(jì)、臺(tái)式離心機(jī)、水浴鍋、可調(diào)式移液器、1ml 玻璃比色皿、研缽、冰、無(wú)水乙醇和蒸餾水

樣本的前處理:

組織、細(xì)菌或細(xì)胞中胞漿蛋白與線粒體蛋白的分離:

稱取約 0.1g 組織或收集 500 萬(wàn)細(xì)胞,加入 1ml 試劑一和 10μl 試劑三,用冰浴勻漿器或研缽勻漿。將勻漿 600g,4℃離心 5min。

棄沉淀,將上清液移至另一離心管中,11000g,4℃離心 10min。

上清液即胞漿提取物,可用于測(cè)定從線粒體泄漏的CS(此步可選做)。

在步驟④的沉淀中加入 200μl 試劑二和 2μl 試劑三,超聲波破碎(冰浴,功率 20%或 200W,超聲 3

秒,間隔 10 秒,重復(fù) 30 次),用于線粒體CS 測(cè)定。

測(cè)定步驟:

1、分光光度計(jì)或酶標(biāo)儀預(yù)熱 30min 以上,調(diào)節(jié)波長(zhǎng)至 412nm,蒸餾水調(diào)零。

2、樣本測(cè)定

在試劑五中加入 0.6ml 無(wú)水乙醇和 13ml 試劑四,混勻,37℃(哺乳動(dòng)物)或 25℃(其它物種)孵育 5min;用不完的試劑分裝后-20℃保存,禁止反復(fù)凍融;

測(cè)定管:在EP 管中加入 40μl 樣本、880μl 試劑五和 40μl 試劑六,混勻,37℃反應(yīng) 15min 后立即測(cè)

定吸光值A(chǔ)1。

對(duì)照管:在EP 管中加入 40μl 樣本、880μl 試劑四和 40μl 試劑六,混勻,37℃反應(yīng) 15min 后立即測(cè)定吸光值A(chǔ)2。

計(jì)算ΔA=A1-A2,每個(gè)測(cè)定管設(shè)一個(gè)對(duì)照管。

CS 活性計(jì)算:

按樣本蛋白濃度計(jì)算:

單位的定義:每mg 組織蛋白每分鐘催化產(chǎn)生 1 nmol TNB 定義為一個(gè)酶活力單位。 CS(nmol/min /mg prot)=[ΔA×V 反總÷(ε×d)×109]÷(V 樣×Cpr) ÷T=117.6×ΔA÷Cpr此法需要自行測(cè)定樣本蛋白質(zhì)濃度。

按樣本鮮重計(jì)算:

單位的定義:每g 組織每分鐘催化產(chǎn)生 1 nmol TNB 定義為一個(gè)酶活力單位。

CS(nmol/min /g 鮮重)=[ΔA×V 反總÷(ε×d)×109]÷(W× V 樣÷V 樣總)÷T=23.8×ΔA÷W

按細(xì)菌或細(xì)胞密度計(jì)算:

單位的定義:每 1 萬(wàn)個(gè)細(xì)菌或細(xì)胞每分鐘催化產(chǎn)生 1 nmol TNB 定義為一個(gè)酶活力單位。

CS(nmol/min /104 cell)=[ΔA×V 反總÷(ε×d)×109]÷(500×V 樣÷V 樣總)÷T=0.0475×ΔA

V 反總:反應(yīng)體系總體積,9.6×10-4 L;ε:TNB 摩爾消光系數(shù),1.36×104 L / mol /cm;d:比色皿光徑,1cm; V 樣:加入樣本體積,0.04 ml;V 樣總:加入提取液體積,0.202 ml;T:反應(yīng)時(shí)間,15 min;Cpr:樣本 蛋白質(zhì)濃度,mg/ml;W:樣本質(zhì)量,g;500:細(xì)胞或細(xì)菌總數(shù),500 萬(wàn)。


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