中性木聚糖酶（Neutral Xylanase，NEX）測(cè)定試劑盒說明書

微量法 100 管/48 樣

中性木聚糖酶測(cè)定試劑盒 糖代謝

正式測(cè)定前務(wù)必取 2-3 個(gè)預(yù)期差異較大的樣本做預(yù)測(cè)定測(cè)定意義：

木聚糖酶(EC 3.2.1.8)主要由微生物產(chǎn)生，能催化水解木聚糖，也被稱為戊聚糖酶或半纖維素酶，可分解釀造或飼料工業(yè)中的原料細(xì)胞壁以及β-葡聚糖，降低釀造中物料的粘度，促進(jìn)有效物質(zhì)的釋放，以及降低飼料中的非淀粉多糖，促進(jìn)營養(yǎng)物質(zhì)的吸收利用，因而廣泛的應(yīng)用于釀造和飼料工業(yè)中，NEX 一般分離自最適生長pH 為 6-8 的微生物。

測(cè)定原理：

NEX 在中性環(huán)境中催化木聚糖降解成還原性寡糖和單糖，在沸水浴條件下進(jìn)一步與 3,5-二硝基水楊中發(fā)生顯色反應(yīng)，在 540nm 處有特征吸收峰，反應(yīng)液顏色的深淺與酶解產(chǎn)生的還原糖量成正比，通過測(cè)定反應(yīng)液在 540nm 吸光值增加速率，可計(jì)算NEX 活力。

組成：

試劑一：液體 10ml×1 瓶，4℃避光保存。（若出現(xiàn)白色絮狀或顆粒狀沉淀，可 60℃加熱溶解后使用）。

自備儀器和用品：

天平、低溫離心機(jī)、恒溫水浴鍋，可見分光光度計(jì)/酶標(biāo)儀、微量石英比色皿/96 孔板和蒸餾水。

粗酶提取：

發(fā)酵液：發(fā)酵液于 8000g，4℃，離心 15min，取上清，作為待測(cè)樣品。

酶干粉：稱約 0.1mg，加 1ml 緩沖液溶解待測(cè)。

組織樣本：按照組織質(zhì)量（g）：提取液體積(ml)為 1：5~10 的比例（建議稱取約 0.1g 組織，加入 1ml緩沖液）進(jìn)行冰浴勻漿，然后 8000g，4℃，離心 10min，取上清待測(cè)。

測(cè)定操作表：

1、分光光度計(jì)/酶標(biāo)儀預(yù)熱 30min，調(diào)節(jié)波長至 540nm。

2、操作表

NEX 計(jì)算公式：

用微量石英比色皿測(cè)定的計(jì)算公式如下

標(biāo)準(zhǔn)曲線：y = 1.6904x + 0.0058，R2 = 0.9989

按液體體積活力計(jì)算：

酶活定義：50℃，pH6.0 條件下，每毫升液體樣本每分鐘分解木聚糖產(chǎn)生 1nmol 還原糖所需的酶量為一個(gè)中性木聚糖酶的活力單位。

NEX 活力（nmol/min/ml）= （ΔA-0.0058）÷1.6904÷150÷T×稀釋倍數(shù)×106

= 657× (ΔA-0.0058)

按蛋白濃度計(jì)算：

酶活定義：50℃，pH6.0 條件下，每毫克蛋白每分鐘分解木聚糖產(chǎn)生 1nmol 還原糖所需的酶量為一個(gè)中性木聚糖酶的活力單位。

NEX 活力（nmol/min/mg prot）= （ΔA -0.0058）÷1.6904÷150÷T×稀釋倍數(shù)×106÷Cpr

= 657×(ΔA -0.0058 ) ÷Cpr

按鮮重計(jì)算：

酶活定義：50℃，pH6.0 條件下，每克樣本每分鐘分解木聚糖產(chǎn)生 1nmol 還原糖所需的酶量為一個(gè)中性木聚糖酶的活力單位。

NEX 活力（nmol/min/g 鮮重）= （ΔA -0.0058）÷1.6904÷150÷T×稀釋倍數(shù)×106÷W

= 657×(ΔA -0.0058 ) ÷W

150：木糖的分子量；T：反應(yīng)時(shí)間，30min；稀釋倍數(shù)=V 反總÷V 樣=300µL÷60µL=5；

106：轉(zhuǎn)化因子，即 1mg/ml=106ng/ml；Cpr：樣本蛋白濃度，mg/ml；W：樣本質(zhì)量，g。

用 96 孔板測(cè)定的計(jì)算公式如下

標(biāo)準(zhǔn)曲線：y = 0.8452x + 0.0058，R2 = 0.9989

按液體體積活力計(jì)算：

酶活定義：50℃，pH6.0 條件下，每毫升液體樣本每分鐘分解木聚糖產(chǎn)生 1nmol 還原糖所需的酶量為一個(gè)中性木聚糖酶的活力單位。

NEX 活力（nmol/min/ml）= （ΔA-0.0058）÷0.8452÷150÷T×稀釋倍數(shù)×106

= 1315× (ΔA-0.0058)

按蛋白濃度計(jì)算：

酶活定義：50℃，pH6.0 條件下，每毫克蛋白每分鐘分解木聚糖產(chǎn)生 1nmol 還原糖所需的酶量為一個(gè)中性木聚糖酶的活力單位。

NEX 活力（nmol/min/mg prot）= （ΔA -0.0058）÷0.8452÷150÷T×稀釋倍數(shù)×106÷Cpr

= 1315×(ΔA -0.0058 ) ÷Cpr

按鮮重計(jì)算：

酶活定義：50℃，pH6.0 條件下，每克樣本每分鐘分解木聚糖產(chǎn)生 1nmol 還原糖所需的酶量為一個(gè)中性木聚糖酶的活力單位。

NEX 活力（nmol/min/g 鮮重）= （ΔA -0.0058）÷0.8452÷150÷T×稀釋倍數(shù)×106÷W

= 1315×(ΔA -0.0058 ) ÷W

150：木糖的分子量；T：反應(yīng)時(shí)間，30min；稀釋倍數(shù)=V 反總÷V 樣=300µL÷60µL=5；

106：轉(zhuǎn)化因子，即 1mg/ml=106ng/ml；Cpr：樣本蛋白濃度，mg/ml；W：樣本質(zhì)量，g。

注意事項(xiàng)：

吸光度變化應(yīng)該控制在 0.01~0.8 之間，否則加大樣品量或稀釋樣品，注意計(jì)算公式中參與計(jì)算的稀釋倍數(shù)要相應(yīng)改變；也可以延長或者縮短反應(yīng)時(shí)間。

試劑盒 2-8℃保存，保質(zhì)期 3 個(gè)月，建議盡快使用。

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