土壤總磷/有機(jī)磷/無機(jī)磷含量測(cè)定試劑盒說明書

微量法 100T/96S

土壤總磷/有機(jī)磷/無機(jī)磷含量測(cè)定試劑盒-

正式測(cè)定前務(wù)必取 2-3 個(gè)預(yù)期差異較大的樣本做預(yù)測(cè)定測(cè)定意義：

土壤總磷包括有機(jī)磷和無機(jī)磷，其中無機(jī)磷能夠直接被植物利用。土壤有機(jī)磷經(jīng)過礦化分解而轉(zhuǎn)化為無機(jī)磷。同時(shí)測(cè)定土壤總磷、有機(jī)磷和無機(jī)磷，可以全面反映土壤磷營(yíng)養(yǎng)狀況。

測(cè)定原理：

利用鉬藍(lán)法定磷。取一份土樣，通過浸提法測(cè)定土壤無機(jī)磷含量；另外取一份土樣，經(jīng)高溫灼燒后，土壤有機(jī)磷轉(zhuǎn)化為無機(jī)磷，測(cè)得土壤總磷含量；總磷含量減去無機(jī)磷含量，即可計(jì)算出有機(jī)磷含量。

試劑組成和配制：

試劑一：液體×1 瓶，4℃保存。臨用前用蒸餾水稀釋 10 倍后再用。

試劑三：粉劑×1 瓶，4℃避光保存。臨用前配制，加入 8ml 蒸餾水，充分溶解后加入 4ml 試劑二，混勻。

標(biāo)準(zhǔn)品：液體×1 支，20 μmol/L 無機(jī)磷標(biāo)準(zhǔn)品，4℃保存。

自備儀器和用品：

可見分光光度計(jì)/酶標(biāo)儀、微量玻璃比色皿/96 孔板、臺(tái)式離心機(jī)、可調(diào)式水浴鍋，分析天平、可調(diào)式移液器、550℃高溫電爐、蒸餾水、100 目篩子（可更?。?。

土壤不同形態(tài)磷提取：

無機(jī)磷：稱取通過 100 目篩子的風(fēng)干土樣 0.01g，轉(zhuǎn)移到 1ml 離心管，加入 1ml 試劑一，震蕩混勻，然后置于 45℃水浴 1h，8000g，25℃離心 10min，取上清液一，用于無機(jī)磷含量測(cè)定。

總磷提取：取通過 100 目篩子的風(fēng)干土樣，550℃灼燒 1h，冷卻后稱取約 0.01g，轉(zhuǎn)移到 1 ml 離心管，加入 1ml 試劑一，震蕩混勻，然后置于 45℃水浴 1h，8000g，25℃離心 10min，取上清液二，用于總磷含量測(cè)定。

測(cè)定步驟：

分光光度計(jì)/酶標(biāo)儀預(yù)熱 30 min，調(diào)節(jié)波長(zhǎng)到 660 nm，蒸餾水調(diào)零。

打開水浴鍋，調(diào)節(jié)溫度到 40℃。

空白管：取EP 管，依次加入 100μl 蒸餾水，100μl 試劑三，混勻后置于 40℃水浴保溫 10min，室溫冷卻 10 min 后于 660 nm 測(cè)定吸光度，記為A 空白管。

標(biāo)準(zhǔn)管：取EP 管，依次加入 10μl 標(biāo)準(zhǔn)液，90μl 蒸餾水，100μl 試劑三，混勻后置于 40℃水浴保溫10min，室溫冷卻 10 min 后于 660 nm 測(cè)定吸光度，記為A 標(biāo)準(zhǔn)管。

測(cè)定管：取EP 管，依次加入 10μl 上清液一或者上清液二，90μl 蒸餾水，100μl 試劑三，混勻后置于 40℃水浴保溫 10min，室溫冷卻 10 min 后于 660 nm 測(cè)定吸光度，記為A 測(cè)定管。

注意：空白管和標(biāo)準(zhǔn)管只需測(cè)定一次。

土壤磷含量計(jì)算：

使用微量石英比色皿測(cè)定的計(jì)算公式如下

土壤無機(jī)磷含量（μmol /g 干重）=[C 標(biāo)準(zhǔn)液×(A 測(cè)定－A 空白)÷(A 標(biāo)準(zhǔn)－A 空白)]×V 總÷W =0.02×(A

測(cè)定－A 空白)÷(A 標(biāo)準(zhǔn)－A 空白)÷W

C 標(biāo)準(zhǔn)液：20 μmol/L； W：土壤樣品質(zhì)量，g； V 總：上清液一總體積，1 ml=0.001 L。

土壤總磷含量（μmol /g 干重）=[C 標(biāo)準(zhǔn)液×(A 測(cè)定－A 空白)÷(A 標(biāo)準(zhǔn)－A 空白)]×V 總÷W=0.02×(A測(cè)定－A 空白)÷(A 標(biāo)準(zhǔn)－A 空白)÷W

C 標(biāo)準(zhǔn)液：20 μmol/L；W：土壤樣品質(zhì)量，g；V 總：上清液二總體積，1ml=0.001 L。 3.土壤有機(jī)磷（μmol /g 干重）=土壤總磷-土壤無機(jī)磷

使用 96 孔板測(cè)定的計(jì)算公式如下

土壤無機(jī)磷含量（μmol /g 干重）=[C 標(biāo)準(zhǔn)液×(A 測(cè)定－A 空白)÷(A 標(biāo)準(zhǔn)－A 空白)]×V 總÷W =0.02×(A測(cè)定－A 空白)÷(A 標(biāo)準(zhǔn)－A 空白)÷W

C 標(biāo)準(zhǔn)液：20 μmol/L； W：土壤樣品質(zhì)量，g； V 總：上清液一總體積，1 ml=0.001 L。

土壤總磷含量（μmol /g 干重）=[C 標(biāo)準(zhǔn)液×(A 測(cè)定－A 空白)÷(A 標(biāo)準(zhǔn)－A 空白)]×V 總÷W=0.02×(A測(cè)定－A 空白)÷(A 標(biāo)準(zhǔn)－A 空白)÷W

C 標(biāo)準(zhǔn)液：20 μmol/L；W：土壤樣品質(zhì)量，g；V 總：上清液二總體積，1ml=0.001 L。 4.土壤有機(jī)磷（μmol /g 干重）=土壤總磷-土壤無機(jī)磷。

注意事項(xiàng)：

試劑三配制過程中，可能會(huì)產(chǎn)生黑色固體，其不影響結(jié)果，注意吸取時(shí)不要將黑色固體吸入。

土壤總磷/有機(jī)磷/無機(jī)磷含量測(cè)定試劑盒-