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北京諾博萊德科技有限公司
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當(dāng)前位置:北京諾博萊德科技有限公司>>生化試劑>>光合系列>> BU60033-磷酸甘油醛脫氫酶試劑盒 光合系列

3-磷酸甘油醛脫氫酶試劑盒 光合系列

參  考  價面議
具體成交價以合同協(xié)議為準(zhǔn)

產(chǎn)品型號BU6003

品       牌NobleRyder/諾博萊德

廠商性質(zhì)生產(chǎn)商

所  在  地北京市

更新時間:2025-04-10 14:16:18瀏覽次數(shù):106次

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供貨周期 現(xiàn)貨 規(guī)格 25T/24S / 50T/48S
貨號 BU6003 應(yīng)用領(lǐng)域 環(huán)保,化工,生物產(chǎn)業(yè),農(nóng)林牧漁,制藥/生物制藥
主要用途 3-磷酸甘油酸激酶催化三磷酸甘油酸和 ATP 生成 1,3 二磷酸甘油酸
3-磷酸甘油酸激酶催化三磷酸甘油酸和 ATP 生成 1,3 二磷酸甘油酸。GAPDH 逆向催化 1,3 二磷酸甘油酸和NADH 生成 3 磷酸甘油醛、無機(jī)磷和 NAD,340nm 處測定NADH 的減少量可反映GADPH 活性的高低。
3-磷酸甘油醛脫氫酶試劑盒 光合系列

3-磷酸甘油醛脫氫酶(Glyceraldehyde-3-phosphate dehydrogenase,GAPDH)試劑盒說明書

分光光度法

3-磷酸甘油醛脫氫酶試劑盒 光合系列

正式測定前務(wù)必取 2-3 個預(yù)期差異較大的樣本做預(yù)測定測定意義:

GAPDH 催化 3-磷酸甘油醛氧化生成 1,3-二磷酸甘油酸,是糖酵解途徑的關(guān)鍵酶,與糖異生途徑、體內(nèi)血糖濃度的維持和糖尿病的發(fā)生密切相關(guān),在機(jī)體糖、脂、蛋白代謝紊亂疾病中發(fā)揮重要作用。

測定原理:

3-磷酸甘油酸激酶催化三磷酸甘油酸和 ATP 生成 1,3 二磷酸甘油酸。GAPDH 逆向催化 1,3 二磷酸甘油酸和NADH 生成 3 磷酸甘油醛、無機(jī)磷和 NAD,340nm 處測定NADH 的減少量可反映GADPH 活性的高低。

組成:

產(chǎn)品名稱

BU6003-25T/24S

BU6003-50T/48S

Storage

提取液一

25ml

50ml

4℃

提取液二

25ml

50ml

4℃

試劑一:粉劑

1

1

-20℃

試劑二:液體

25ml

50ml

4℃

試劑三:液體

14μl

28μl

4℃

說明書

一份


自備儀器和用品:

分光光度計、恒溫水浴鍋、臺式離心機(jī)、可調(diào)式移液器、1 ml 石英比色皿、研缽、冰和蒸餾水。

組織樣本的前處理:

①總GAPDH 酶提?。航ㄗh稱取約 0.1g 樣本,加入 1ml 提取液一,冰浴勻漿后超聲破碎(冰浴,200W,破碎 3s,間歇 7s,總時間 1min),然后 4℃,8000g 離心 10min,取上清測定。

②胞漿和葉綠體 GAPDH 酶的分離:按照植物組織質(zhì)量(g):提取液體積(ml)1:5~10 的比例(建議稱取約 0.1g 樣本,加入 1ml 提取液一),冰浴勻漿后于 4℃,200g 離心 5min,棄沉淀,取上清在 4℃, 8000g 離心 10min,取上清用于測定胞漿 GAPDH 酶活性,取沉淀加 1ml 提取液二,震蕩溶解后超聲破碎(冰浴,200W,破碎 3s,間歇 7s,總時間 1min),然后 4℃,8000g 離心 10min,取上清測定葉綠體中 GAPDH 酶活性。

建議測定總GAPDH 酶活性,按照步驟①提取粗酶液,若需要分別測定胞漿和葉綠體中的 GAPDH,則按照步驟②提取粗酶液。

細(xì)菌或培養(yǎng)細(xì)胞的前處理:

先收集細(xì)菌或細(xì)胞到離心管內(nèi),離心后棄上清;按照細(xì)菌或細(xì)胞數(shù)量(104 個):提取液一體積(ml)500~1000:1 的比例(建議 500 萬細(xì)菌或細(xì)胞加入 1ml 提取液一),超聲波破碎細(xì)菌或細(xì)胞(冰浴,功20%或 200W,超聲 3s,間隔 10s,重復(fù) 30 次);8000g 4℃離心 10min,取上清,置冰上待測。

測定步驟:

1、分光光度計預(yù)熱 30min 以上,調(diào)節(jié)波長至 340nm,蒸餾水調(diào)零。

2、樣本測定

工作液的配制:將試劑二全部倒入試劑一瓶中,充分溶解,37℃(哺乳動物)25℃(其它物種)預(yù)熱 10 分鐘;用不完的試劑分裝后-20℃保存,禁止反復(fù)凍融。

在試劑三中加入 500μL 蒸餾水,充分混勻待用;用不完的試劑分裝后-20℃保存,禁止反復(fù)凍融。

1ml 石英比色皿中加入 30μL 樣本、20μL 試劑三和 950μL 工作液,混勻,加入最后一個試劑的同時開始計時,記錄 340nm 20s 時的吸光值A1 和 5min20s 后的吸光值A2,計算ΔA=A1-A2。

GAPDH 活性計算:

按樣本蛋白濃度計算

單位的定義:每mg 組織蛋白每分鐘消耗 1 nmol NADH 定義為一個酶活力單位。

GAPDH(nmol/min/mg prot)=[ΔA×V 反總÷(ε×d)×109]÷(V 樣×Cpr) ÷T=1072×ΔA÷Cpr

按樣本鮮重計算

單位的定義:每g 組織每分鐘消耗 1 nmol NADH 定義為一個酶活力單位。

GAPDH(nmol/min /g 鮮重)=[ΔA×V 反總÷(ε×d)×109]÷(W ×V 樣÷V 樣總) ÷T=1072×ΔA÷W

按細(xì)菌或細(xì)胞密度計算

單位的定義:每一萬個細(xì)菌或細(xì)胞每分鐘消耗 1 nmol NADH 定義為一個酶活力單位。

GAPDH(nmol/min/104 cell)=[ΔA×V 反總÷(ε×d)×109]÷(500 ×V 樣÷V 樣總) ÷T=2.144×ΔA

V 反總:反應(yīng)體系總體積,1×10-3 L;ε:NADH 摩爾消光系數(shù),6.22×103 L / mol /cm;d:比色皿光徑,1cm; V 樣:加入樣本體積,0.03 ml;V 樣總:加入提取液體積,1 ml;T:反應(yīng)時間,5 min;Cpr:樣本蛋白質(zhì)濃度,mg/ml;W:樣本質(zhì)量,g;500:細(xì)菌或細(xì)胞總數(shù),500 萬。


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