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北京諾博萊德科技有限公司
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堿性磷酸酶活性測(cè)定試劑盒 酯酶系列

參  考  價(jià)面議
具體成交價(jià)以合同協(xié)議為準(zhǔn)

產(chǎn)品型號(hào)DB6007

品       牌NobleRyder/諾博萊德

廠商性質(zhì)生產(chǎn)商

所  在  地北京市

更新時(shí)間:2025-04-11 17:55:01瀏覽次數(shù):114次

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供貨周期 現(xiàn)貨 規(guī)格 50T/24S
貨號(hào) DB6007 應(yīng)用領(lǐng)域 環(huán)保,化工,生物產(chǎn)業(yè),農(nóng)林牧漁,制藥/生物制藥
主要用途 ,在堿性環(huán)境中可水解各種天然及人工合成的磷脂單酯化合物
在堿性環(huán)境中,AKP/ALP 催化磷酸苯二鈉生成游離酚;酚與 4-氨基安ti比林和鐵qing化鉀反應(yīng)紅色ya醌衍生物,在 510nm 有特征光吸收;通過(guò)測(cè)定 510 nm 吸光度增加速率,來(lái)計(jì)算AKP 活性。
堿性磷酸酶活性測(cè)定試劑盒 酯酶系列

堿性磷酸酶(alkaline phosphatase,AKP/ALP)活性測(cè)定試劑盒

分光光度法 50 管/24

堿性磷酸酶活性測(cè)定試劑盒 酯酶系列

正式測(cè)定前務(wù)必取 2-3 個(gè)預(yù)期差異較大的樣本做預(yù)測(cè)定測(cè)定意義:

AKP/ALP 是一種含鋅的糖蛋白酶,在堿性環(huán)境中可水解各種天然及人工合成的磷脂單酯化合物。

AKP/ALP 廣泛分布于人體各臟器中,以肝臟為主。

測(cè)定原理:

在堿性環(huán)境中,AKP/ALP 催化磷酸苯二鈉生成游離酚;酚與 4-氨基安ti比林和鐵qing化鉀反應(yīng)紅色ya醌衍生物,在 510nm 有特征光吸收;通過(guò)測(cè)定 510 nm 吸光度增加速率,來(lái)計(jì)算AKP 活性。

組成:

產(chǎn)品名稱(chēng)

DB6007-50T/24S

Storage

試劑一:液體

1  

4℃

試劑二:液體

1  

4℃避光

試劑三:液體

1  

4℃避光

試劑四:液體

1  

4℃避光

標(biāo)準(zhǔn)品:液體

1  

4℃

說(shuō)明書(shū)

一份

試劑四:液體×1 瓶,4℃避光保存,未變成藍(lán)綠色之前均可使用。標(biāo)準(zhǔn)品:液體×1 支(EP 管中),2 μ mol/ml 酚標(biāo)準(zhǔn)液,4℃保存。

自備儀器和用品:

可見(jiàn)分光光度計(jì)、臺(tái)式離心機(jī)、水浴鍋、可調(diào)式移液器、1ml 玻璃比色皿和蒸餾水。

粗酶液提取:

組織:按照組織質(zhì)量(g):試劑一體積(ml)為 1:5~10 的比例(建議稱(chēng)取約 0.1g 組織,加入 1ml 試劑一)進(jìn)行冰浴勻漿,4℃、8000g 離心 10min,取上清液待測(cè)。

細(xì)菌或細(xì)胞:按照細(xì)菌或細(xì)胞數(shù)量(104 個(gè)):試劑一體積(ml)為 500~1000:1 的比例(建議 500 萬(wàn)細(xì)胞加入 1ml 試劑一),冰浴超聲波破碎細(xì)胞(功率 300w,超聲 3 秒,間隔 7 秒,總時(shí)間 3min);然后 8000g,4℃,離心 10min,取上清置于冰上待測(cè)。

血液可直接測(cè)定,或者適當(dāng)稀釋后測(cè)定。

測(cè)定步驟:

分光光度計(jì)預(yù)熱 30min,調(diào)節(jié)波長(zhǎng)到 510 nm,蒸餾水調(diào)零。

試劑三置于 37℃水浴中預(yù)熱 30 min。

空白管:取 EP 管,加入 20μl 蒸餾水,200μl 試劑二,200μl 試劑三,混勻后置于 37℃水浴中保溫 15min;加入試劑四 600μl,混勻后于 510 nm 測(cè)定吸光度,記為A 空白管。

標(biāo)準(zhǔn)管:取 EP 管,加入 20μl 標(biāo)準(zhǔn)品,200μl 試劑二,200μl 試劑三,混勻后置于 37℃水浴中保溫 15min;

加入試劑四 600μl,混勻后于 510 nm 測(cè)定吸光度,記為A 標(biāo)準(zhǔn)管。

對(duì)照管:取 EP 管,加入 20μl 上清液,200μl 蒸餾水,200μl 試劑三,混勻后置于 37℃水浴中保溫 15min;加入試劑四 600μl,混勻后于 510 nm 測(cè)定吸光度,記為A 測(cè)定管。

測(cè)定管:取 EP 管,加入 20μl 上清液,200μl 試劑二,200μl 試劑三,混勻后置于 37℃水浴中保溫 15min;

加入試劑四 600μl,混勻后于 510 nm 測(cè)定吸光度,記為A 測(cè)定管。

注意:空白管和標(biāo)準(zhǔn)管只需測(cè)定一次。每個(gè)測(cè)定管設(shè)一個(gè)對(duì)照管。

AKP/ALP 活性計(jì)算:

血液中AKP/ALP 活力計(jì)算

活性單位定義:37℃中每毫升血液每分鐘催化產(chǎn)生 1μmol 酚定義為 1 個(gè)酶活單位。

AKP/ALP 活力(μmol/min /ml)= [C 標(biāo)準(zhǔn)品×(A 測(cè)定管-A 對(duì)照管)÷(A 標(biāo)準(zhǔn)管-A 空白管)×V 反總] ÷V 樣

÷T=6.8×(A 測(cè)定管-A 對(duì)照管)÷(A 標(biāo)準(zhǔn)管-A 空白管)

組織、細(xì)菌或細(xì)胞中AKP/ALP 活性計(jì)算

按照蛋白濃度計(jì)算

活性單位定義:37℃中每毫克蛋白每分鐘催化產(chǎn)生 1 μ mol 酚定義為 1 個(gè)酶活單位。 AKP/ALP(μmol/min/mg prot)=[C 標(biāo)準(zhǔn)品×(A 測(cè)定管-A 對(duì)照管)÷(A 標(biāo)準(zhǔn)管-A 空白管)×V 反總]÷(Cpr×V樣)÷T=6.8×(A 測(cè)定管-A 對(duì)照管)÷(A 標(biāo)準(zhǔn)管-A 空白管) ÷Cpr

按照樣本質(zhì)量計(jì)算

活性單位定義:37℃中每克組織每分鐘催化產(chǎn)生 1 μ mol 酚定義為 1 個(gè)酶活單位。

AKP/ALP(μmol/min/g 鮮重)=[C 標(biāo)準(zhǔn)品×(A 測(cè)定管-A 對(duì)照管)÷(A 標(biāo)準(zhǔn)管-A 空白管)×V 反總]÷(W×V 樣÷V樣總)÷T=6.8×(A 測(cè)定管-A 對(duì)照管)÷(A 標(biāo)準(zhǔn)管-A 空白管) ÷W

按照細(xì)菌或細(xì)胞數(shù)量計(jì)算

活性單位定義:37℃中每 104 個(gè)細(xì)菌或細(xì)胞每分鐘催化產(chǎn)生 1 μ mol 酚定義為 1 個(gè)酶活單位。AKP/ALP (μmol/min/104 cell)= [C 標(biāo)準(zhǔn)品×(A 測(cè)定管-A 對(duì)照管)÷(A 標(biāo)準(zhǔn)管-A 空白管)×V 反總]÷(細(xì)胞數(shù)量×V 樣÷V 樣總)÷T= 6.8×(A 測(cè)定管-A 對(duì)照管)÷(A 標(biāo)準(zhǔn)管-A 空白管) ÷細(xì)胞數(shù)量

C 標(biāo)準(zhǔn)品:2μmol/ml;V 反總:反應(yīng)體系總體積(ml),1020μl=1.02 ml; V 樣:加入反應(yīng)體系中上清液體積(ml),0.020ml;V 樣總:加入提取液體積,1ml;T:反應(yīng)時(shí)間(min),15 min。

注意事項(xiàng):

試劑二、試劑三和試劑四均需避光保存。

試劑四變藍(lán)綠色后不能再使用。

加入試劑四后必須立即混勻,否則顯色不wan全。


堿性磷酸酶活性測(cè)定試劑盒 酯酶系列

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