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產(chǎn)品簡介：

現(xiàn)在最-常用的質(zhì)粒純化試劑盒幾乎都是基于堿變性原理，必須使用三種溶液進行處理，一般需要30分鐘左右。本產(chǎn)品采用新型技術，只需要一種溶液處理即可以完成細菌裂解，并且裂解物可以直接上柱純化質(zhì)粒DNA。

產(chǎn)品特點：

1.一步式，提取一個樣品只需10分鐘左右，比傳統(tǒng)的堿變性方法快捷。

2.質(zhì)粒DNA產(chǎn)量跟經(jīng)典堿變性法相當，一般1-5mL可以得到3-15ug（對低拷貝質(zhì)粒）和5-35ug（對高拷貝質(zhì)粒）。

3.適用于高拷貝、中拷貝和低拷貝質(zhì)粒的提取。

4.適用于各種大腸桿菌宿主菌。

5.所得質(zhì)粒DNA呈超螺旋結構的比例比堿變性法更高。

6.基因組DNA污染少。

7.由于操作太快，溶液中的RNase來不及降解RNA，一般會有少量RNA污染，但不影響后續(xù)實驗。

8.可以直接用于電泳、酶切、PCR、細菌轉化、分子克隆、測序等實驗。

9.超快質(zhì)粒DNA純化試劑盒只能用于科研。

產(chǎn)品參數(shù)：

成份規(guī)格包裝材料

超快質(zhì)粒DNA純化溶液A30 mL30ml棕色玻璃瓶

離心吸附柱50套塑料袋

專用洗柱液50 mL30mL本色瓶

DNA洗脫液（基因組純化用）10 mL10mL本色瓶

使用手冊1份無

運輸及保存

常溫運輸及保存，超快質(zhì)粒DNA純化溶液A長期保存需要放4℃，有效期一年。

自備試劑

無

使用方法：

1.用塑料離心管收集0.5-5 mL過夜培養(yǎng)的飽和新鮮菌液，室溫14000g離心半分鐘，棄上清（培養(yǎng)基）。注意: 可以使用-20℃凍存的細菌沉淀和4℃放置過夜的細菌培養(yǎng)液，但后者的質(zhì)粒回收效率較低。

2.在細菌沉淀中加入0.6mL超快質(zhì)粒DNA純化溶液A，充分吹打或振蕩裂解細菌直到裂解變澄清，一般需要半分鐘左右。注:此方法不同于堿裂解法，此步需要充分吹打，使基因組DNA斷裂。

3.將裂解液全部轉移到離心吸附柱中，直接離心。如果靜置3-5分鐘充分裂解細菌后再離心，則質(zhì)?；厥章蕦⑻岣?0%左右。

4.室溫14000 rpm離心1分鐘，棄穿透液。一般菌液越多裂解液越稠，需要離心的時間就越長，所以不建議使用超過5mL的起始菌液。如果離心1分鐘后還有少量液體在離心柱中殘留，可以適當延長離心時間直到所有液體成功過柱。有的離心機標注的離心速度跟實際的速度不符合，這種情況下，可以使用離心機的最大離心速度離心。

5.在離心吸附柱中加入0.7 mL的專用洗柱液，室溫14000rpm離心半分鐘，棄穿透液。

6.如果需要，可以再在離心吸附柱中加入0.3 mL的專用洗柱液，室溫14000rpm離心半分鐘，棄穿透液。此步可以降低RNA污染，但由于RNA污染并不影響后續(xù)實驗，為了快捷，一般可以跳過此步。

7.室溫14000rpm離心半分鐘，甩干殘留液體。注意：此步不能省略，否則殘留洗柱液會影響后續(xù)的電泳上樣（DNA沉不到加樣孔里去）和酶反應。

8.將離心柱置于一個自備的1.5 mL塑料離心管中，加入50 uL DNA洗脫液（基因組DNA專用）。

9.室溫14000 g離心半分鐘，離心管底溶液即質(zhì)粒DNA，可以直接用于后續(xù)實驗（濃度測定、酶切、電泳和測序）或放冰箱長期保存。 一般1-5mL菌液可以得到3-15ug（對低拷貝質(zhì)粒）或5-35ug（對高拷貝質(zhì)粒）質(zhì)粒DNA。

10.本方法得到的質(zhì)粒DNA一般足夠各種后續(xù)實驗。如果需要進一步提高質(zhì)粒DNA產(chǎn)量，可以再加30-50uL DNA洗脫液2.0到離心吸附柱中再次洗脫，可以得到相當于第一次洗脫量10-20%的質(zhì)粒DNA。也可以將第一次洗脫得到的質(zhì)粒DNA溶液再加到離心吸附柱中洗脫，可以使質(zhì)粒DNA產(chǎn)量提高10-20%。

注意：本方法提取的質(zhì)粒DNA有如下特點：

1、因為沒有使用劇烈的堿變性步驟，所以質(zhì)粒呈現(xiàn)天然的超螺旋結構的比例較大。

2、由于整個操作非常快速，又沒有使用堿來降解RNA，所以試劑中的RNase都來不及把細菌的內(nèi)源RNA徹-底降解，故所得質(zhì)粒比堿變性法提取的質(zhì)粒有更多的RNA污染，因此不建議使用測OD的方法確定質(zhì)粒DNA的濃度，故最好采用電泳比較法，即通過比較質(zhì)粒DNA跟濃度已知的DNA marker的相對亮度來確定質(zhì)粒的濃度。注意：RNA污染一般不影響電泳、酶切和測序。

3、如果需要徹-底去除RNA污染，則需要在每次加入專用洗柱液后，室溫放置2-5分鐘，讓其含有的RNase充分降解結合在膜上的RNA，離心時降解成小片段的RNA就穿透到收集管，結合在膜上的DNA就更純凈。

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