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產(chǎn)品簡(jiǎn)介：

真核細(xì)胞的 RNA 存在于三個(gè)部位，第一個(gè)部位是細(xì)胞核，主要是剛轉(zhuǎn)錄出來的各種RNA 前體。第二個(gè)部位是細(xì)胞漿，主要是用做翻譯模板的成熟 mRNA、rRNA、tRNA 和miRNA 等。第三個(gè)部位是線粒體和葉綠體這些細(xì)胞器，它們有自己獨(dú)立的 RNA。在某些研究中，需要分部位純化 RNA。本產(chǎn)品就是專門滿足此類需求的試劑盒。

產(chǎn)品特點(diǎn)：

1.采用專用膜裂解液，依次分離細(xì)胞漿、細(xì)胞器裂解液和細(xì)胞核三個(gè)組分，分別用于提  取對(duì)應(yīng)的 RNA。

2.起始材料為培養(yǎng)的哺乳動(dòng)物細(xì)胞，如 HEK293、HeLa 和 HT1080，但不適用于實(shí)體組織和有細(xì)胞壁的真菌細(xì)胞和植物細(xì)胞。

3.基于異硫氰酸胍的沉淀法提取，RNA 回收率高，基因組 DNA 污染少。

4.得到的 RNA 可直接用于 RT-PCR、Northern 雜交、cDNA 合成等實(shí)驗(yàn)

5.性價(jià)比高于進(jìn)口的柱式 RNA 提取產(chǎn)品。

6.本產(chǎn)品足夠 50 次細(xì)胞漿 RNA 純化、50 次細(xì)胞器 RNA 純化和 50 次細(xì)胞核 RNA 純化。一次提取需要 1E6-1E7 個(gè)哺乳動(dòng)物培養(yǎng)細(xì)胞。

7.細(xì)胞核細(xì)胞漿細(xì)胞器RNA純化試劑盒只能用于科研。

產(chǎn)品參數(shù)：

成分規(guī)格包裝

細(xì)胞膜專用裂解液20 mL30 mL 本色瓶

細(xì)胞器專用裂解液20 mL30 mL 本色瓶

CI 混合液50 mL60 mL 棕玻瓶

核酸沉淀劑 B 型150 mL250 mL 本色瓶

RNA 洗脫液10 mL10 mL 本色瓶

使用手冊(cè)1 份無

成分編號(hào)規(guī)格包裝

動(dòng)物 RNA 提取液250 mL250 mL 棕玻瓶

使用手冊(cè)1 份無

運(yùn)輸及保存

常溫運(yùn)輸和保存，動(dòng)物 RNA 提取液需要放 4℃長(zhǎng)期保存，有效期一年。

自備試劑

PBS、胰-酶溶液（0.25% 胰-酶、0.9 mM EDTA）、75%乙醇。

使用方法：

一、細(xì)胞的準(zhǔn)備（本試劑盒不含本步相關(guān)試劑）

1.在直徑 10 cm 的培養(yǎng)皿（面積為 55 平方厘米）中培養(yǎng)貼壁細(xì)胞到 80%融合度，去掉培養(yǎng)基，用常溫自備 PBS 洗滌貼壁細(xì)胞。

2.加入 0.8 mL 胰-酶溶液處理（0.25% 胰-酶、0.9 mM EDTA）37℃保溫直到細(xì)胞分散（至少 2 分鐘）。

3.加入 5 mL 含 10%胎牛血清的培養(yǎng)基終止胰-酶消化，然后將細(xì)胞轉(zhuǎn)移到離心管中。

4.4℃ 500×g 離心 10 分鐘，小心去上清液。

5.加入 0.5 mL 預(yù)冷 PBS 重懸細(xì)胞并轉(zhuǎn)移到 1.5 mL RNase-free 離心管中。

6.4℃ 500×g 離心 10 分鐘，小心去上清液。

二、細(xì)胞漿裂解樣本的準(zhǔn)備

7.在細(xì)胞沉淀中加入 400 ?L 預(yù)冷的細(xì)胞膜專用裂解液。

8.在 4℃冷室的脫色搖床上端對(duì)端搖晃 10 分鐘以確保細(xì)胞膜完-全裂解。9. 4℃ 2000×g 離心 10 分鐘。

10.小心將上清液均分到兩個(gè) 1.5 mL RNase-free 離心管中，分別加入 1 mL 動(dòng)物 RNA提取液，渦旋震蕩 30 秒，標(biāo)記為細(xì)胞漿 RNA，室溫放置待用（跟后面的細(xì)胞器裂解樣本和細(xì)胞核裂解樣本一起純化）。

三、細(xì)胞器裂解樣本的準(zhǔn)備

11.在上步的沉淀（含細(xì)胞核和細(xì)胞器）中加入 400 ?L 預(yù)冷的細(xì)胞器膜專用裂解液。

12.在 4℃或冰上放置 30 分鐘以確保細(xì)胞器膜完-全裂解。13. 4℃ 7000×g 離心 10 分鐘。

14.小心將上清液（細(xì)胞器裂解液）均分到兩個(gè) 1.5 mL RNase-free 離心管中，分別加入 1 mL 動(dòng)物 RNA 提取液，渦旋震蕩 30 秒，標(biāo)記為細(xì)胞器 RNA，室溫放置待用（跟后面的細(xì)胞核裂解樣本一起純化）。

四、細(xì)胞核裂解樣本的準(zhǔn)備

15.在上步的沉淀（含細(xì)胞核）中加入 1 mL 動(dòng)物 RNA 提取液，渦旋震蕩 30 秒，室溫放置 10 分鐘。離心管標(biāo)記為細(xì)胞核 RNA。

16.跟上面的兩個(gè)樣本共 5 管一起進(jìn)入下一步操作。五、RNA 純化

17.在裝有裂解物-動(dòng)物 RNA 提取液混合物的 5 個(gè)離心管中分別加入 0.2 mL CI 混合液，

振蕩器上充分振蕩混均 30 秒。注意：一定要把官底的溶液震蕩起來，否則只是液面的振動(dòng)。

18.14000×g 室溫離心 3 分鐘。

19.將上清液（約 0.6 mL）轉(zhuǎn)移到另一干凈的 1.5 mL 塑料離心管中。下層有機(jī)相（藍(lán)色）和中間層含有 DNA 和蛋白質(zhì)，避免觸及，否則將產(chǎn)生蛋白質(zhì)和 DNA 污染。為保險(xiǎn)起見，可以留下 50-100 ?L 上清液不取。

20.在上清液中加入等體積的核酸沉淀液 B 型，振蕩器上振蕩 30 秒混勻。

21.14000×g 室溫離心 5 分鐘，離心底的側(cè)面將形成 RNA 沉淀。

22.小心吸棄上清液，注意不要吸棄 RNA 沉淀。

23.在含 RNA 沉淀的離心管中加入 1 mL 自備的 75%乙醇，振蕩混勻 30 秒。

24.14000×g 室溫離心 3 分鐘。

25.小心吸棄上清液，注意不要吸棄 RNA 沉淀。

26.短暫快速離心，用移液槍小心吸棄殘留乙醇(約 50 ?L)。注意不要吸棄 RNA 沉淀。此步十分重要，否則殘留的乙醇會(huì)影響 RNA 的后續(xù)使用。

27.室溫放 1-2 分鐘后立即加入 50-100 ?L RNA 洗脫液使 RNA 沉淀溶解。千萬不要用真空離心法使 RNA 沉淀過于干燥，否則 RNA 將變得十分難溶。RNA 樣品可以立即

用于電泳、OD 測(cè)定、RT-PCR 或存放于-80℃待用。

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