目錄:上海烜雅生物科技有限公司>>分子生物學(xué)試劑>>試劑盒>> 細胞核細胞漿細胞器RNA純化試劑盒
供貨周期 | 現(xiàn)貨 | 規(guī)格 | 50次 |
---|---|---|---|
貨號 | XY-D-1883 | 應(yīng)用領(lǐng)域 | 化工,生物產(chǎn)業(yè) |
主要用途 | 科研 | 英文名稱 | Nuclear、Cytosolic & Organelle RNA Purification Kit |
保存條件 | 常溫 | 有效期 | 1年 |
產(chǎn)品簡介:
真核細胞的 RNA 存在于三個部位,第一個部位是細胞核,主要是剛轉(zhuǎn)錄出來的各種RNA 前體。第二個部位是細胞漿,主要是用做翻譯模板的成熟 mRNA、rRNA、tRNA 和miRNA 等。第三個部位是線粒體和葉綠體這些細胞器,它們有自己獨立的 RNA。在某些研究中,需要分部位純化 RNA。本產(chǎn)品就是專門滿足此類需求的試劑盒。
產(chǎn)品特點:
1.采用專用膜裂解液,依次分離細胞漿、細胞器裂解液和細胞核三個組分,分別用于提 取對應(yīng)的 RNA。
2.起始材料為培養(yǎng)的哺乳動物細胞,如 HEK293、HeLa 和 HT1080,但不適用于實體組織和有細胞壁的真菌細胞和植物細胞。
3.基于異硫氰酸胍的沉淀法提取,RNA 回收率高,基因組 DNA 污染少。
4.得到的 RNA 可直接用于 RT-PCR、Northern 雜交、cDNA 合成等實驗
5.性價比高于進口的柱式 RNA 提取產(chǎn)品。
6.本產(chǎn)品足夠 50 次細胞漿 RNA 純化、50 次細胞器 RNA 純化和 50 次細胞核 RNA 純化。一次提取需要 1E6-1E7 個哺乳動物培養(yǎng)細胞。
7.細胞核細胞漿細胞器RNA純化試劑盒只能用于科研。
產(chǎn)品參數(shù):
成分規(guī)格包裝
細胞膜專用裂解液20 mL30 mL 本色瓶
細胞器專用裂解液20 mL30 mL 本色瓶
CI 混合液50 mL60 mL 棕玻瓶
核酸沉淀劑 B 型150 mL250 mL 本色瓶
RNA 洗脫液10 mL10 mL 本色瓶
使用手冊1 份無
成分編號規(guī)格包裝
動物 RNA 提取液250 mL250 mL 棕玻瓶
使用手冊1 份無
運輸及保存
常溫運輸和保存,動物 RNA 提取液需要放 4℃長期保存,有效期一年。
自備試劑
PBS、胰-酶溶液(0.25% 胰-酶、0.9 mM EDTA)、75%乙醇。
使用方法:
一、細胞的準(zhǔn)備(本試劑盒不含本步相關(guān)試劑)
1.在直徑 10 cm 的培養(yǎng)皿(面積為 55 平方厘米)中培養(yǎng)貼壁細胞到 80%融合度,去掉培養(yǎng)基,用常溫自備 PBS 洗滌貼壁細胞。
2.加入 0.8 mL 胰-酶溶液處理(0.25% 胰-酶、0.9 mM EDTA)37℃保溫直到細胞分散(至少 2 分鐘)。
3.加入 5 mL 含 10%胎牛血清的培養(yǎng)基終止胰-酶消化,然后將細胞轉(zhuǎn)移到離心管中。
4.4℃ 500×g 離心 10 分鐘,小心去上清液。
5.加入 0.5 mL 預(yù)冷 PBS 重懸細胞并轉(zhuǎn)移到 1.5 mL RNase-free 離心管中。
6.4℃ 500×g 離心 10 分鐘,小心去上清液。
二、細胞漿裂解樣本的準(zhǔn)備
7.在細胞沉淀中加入 400 ?L 預(yù)冷的細胞膜專用裂解液。
8.在 4℃冷室的脫色搖床上端對端搖晃 10 分鐘以確保細胞膜完-全裂解。9. 4℃ 2000×g 離心 10 分鐘。
10.小心將上清液均分到兩個 1.5 mL RNase-free 離心管中,分別加入 1 mL 動物 RNA提取液,渦旋震蕩 30 秒,標(biāo)記為細胞漿 RNA,室溫放置待用(跟后面的細胞器裂解樣本和細胞核裂解樣本一起純化)。
三、細胞器裂解樣本的準(zhǔn)備
11.在上步的沉淀(含細胞核和細胞器)中加入 400 ?L 預(yù)冷的細胞器膜專用裂解液。
12.在 4℃或冰上放置 30 分鐘以確保細胞器膜完-全裂解。13. 4℃ 7000×g 離心 10 分鐘。
14.小心將上清液(細胞器裂解液)均分到兩個 1.5 mL RNase-free 離心管中,分別加入 1 mL 動物 RNA 提取液,渦旋震蕩 30 秒,標(biāo)記為細胞器 RNA,室溫放置待用(跟后面的細胞核裂解樣本一起純化)。
四、細胞核裂解樣本的準(zhǔn)備
15.在上步的沉淀(含細胞核)中加入 1 mL 動物 RNA 提取液,渦旋震蕩 30 秒,室溫放置 10 分鐘。離心管標(biāo)記為細胞核 RNA。
16.跟上面的兩個樣本共 5 管一起進入下一步操作。五、RNA 純化
17.在裝有裂解物-動物 RNA 提取液混合物的 5 個離心管中分別加入 0.2 mL CI 混合液,
振蕩器上充分振蕩混均 30 秒。注意:一定要把官底的溶液震蕩起來,否則只是液面的振動。
18.14000×g 室溫離心 3 分鐘。
19.將上清液(約 0.6 mL)轉(zhuǎn)移到另一干凈的 1.5 mL 塑料離心管中。下層有機相(藍色)和中間層含有 DNA 和蛋白質(zhì),避免觸及,否則將產(chǎn)生蛋白質(zhì)和 DNA 污染。為保險起見,可以留下 50-100 ?L 上清液不取。
20.在上清液中加入等體積的核酸沉淀液 B 型,振蕩器上振蕩 30 秒混勻。
21.14000×g 室溫離心 5 分鐘,離心底的側(cè)面將形成 RNA 沉淀。
22.小心吸棄上清液,注意不要吸棄 RNA 沉淀。
23.在含 RNA 沉淀的離心管中加入 1 mL 自備的 75%乙醇,振蕩混勻 30 秒。
24.14000×g 室溫離心 3 分鐘。
25.小心吸棄上清液,注意不要吸棄 RNA 沉淀。
26.短暫快速離心,用移液槍小心吸棄殘留乙醇(約 50 ?L)。注意不要吸棄 RNA 沉淀。此步十分重要,否則殘留的乙醇會影響 RNA 的后續(xù)使用。
27.室溫放 1-2 分鐘后立即加入 50-100 ?L RNA 洗脫液使 RNA 沉淀溶解。千萬不要用真空離心法使 RNA 沉淀過于干燥,否則 RNA 將變得十分難溶。RNA 樣品可以立即
用于電泳、OD 測定、RT-PCR 或存放于-80℃待用。
選擇我們的細胞核細胞漿細胞器RNA純化試劑盒,就是選擇精準(zhǔn)、高效、可靠的檢測方案,為您的科研實驗保駕護航!
(空格分隔,最多3個,單個標(biāo)簽最多10個字符)