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線粒體的活體染色的及電鏡照片觀察2015/08/13: 實(shí)驗(yàn)原理線粒體是細(xì)胞內(nèi)一種重要細(xì)胞器，是細(xì)胞進(jìn)行呼吸作用的場所。細(xì)胞的各項(xiàng)活動(dòng)所需要的能量，主要是通過線粒體呼吸作用來提供的?；铙w染色是應(yīng)用無毒或毒性較小的染色劑真實(shí)地顯示活細(xì)胞內(nèi)某些結(jié)構(gòu)而又很少影響細(xì)胞生命活動(dòng)的一種染色方法。詹納斯綠B是線垃體的專一性活體染色劑。線粒體中細(xì)胞色素氧化酶使染料保持氧化狀態(tài)呈藍(lán)綠色，而在周圍的細(xì)胞質(zhì)中染料被還原，成為無色狀態(tài)。實(shí)驗(yàn)試劑1.l／300詹納斯綠B染液2.Ringer氏液(哺乳類用)實(shí)驗(yàn)設(shè)備1.顯微鏡2.手術(shù)器材一套3.解剖盤4.小平皿5.載片6.蓋片7

成年豬胰島分離純化方法的優(yōu)化2015/08/13: 實(shí)驗(yàn)試劑膠原酶V，512kut/mg(Sigma公司)，DNA酶(Sigma公司)，胎牛血清(Gibco公司)，RPMI1640培養(yǎng)液(Gibco公司)，Dextran(Pharmacia公司)，Hanks平衡鹽溶液(Gibco公司)。實(shí)驗(yàn)設(shè)備離心機(jī)，注射器，顯微鏡，超凈工作臺(tái)等。實(shí)驗(yàn)材料成年雜種豬，豬齡12mo，體質(zhì)量150kg左右，豬被屠宰放血后，在相對(duì)無菌條件下迅速取出胰腺，保存于4℃Hanks液中送至實(shí)驗(yàn)室，熱缺血時(shí)間少于10min，冷缺血時(shí)間少于90min。實(shí)驗(yàn)步驟1.胰島分離胰腺取回

小麥總RNA的提取2015/08/13: 實(shí)驗(yàn)步驟1.所有容器高溫滅菌兩次，DEPC高溫滅菌，所有的試劑用DEPC配制，高溫滅菌。2.在一滅菌2mL管中加入：5mol/L異硫氰酸胍0.7mL、苯酚0.4mL、NaAc(pH4.0)0.1mL。3.稱取0.2g小麥黃化苗的葉片，迅速在液氮中研磨成粉末，轉(zhuǎn)入已準(zhǔn)備好的離心管中，劇烈震蕩。4.混勻，冰浴30min。5.4℃，12000rpm，10min。6.上清至另一離心管中加0.4mL氯仿，劇烈震蕩。冰浴放置5min。7.4℃，12000rpm，10min。8.棄有機(jī)相(下層)加入0.4mL

葡萄糖在小鼠克隆胚胎發(fā)育中的作用2015/08/05: 實(shí)驗(yàn)步驟1.克隆胚胎制備和胚胎培養(yǎng)卵母細(xì)胞在含有5.5mM葡萄糖的CZB培養(yǎng)液中培養(yǎng)。用含有5.5mM葡萄糖和2.5ug/ml細(xì)胞松弛素B的HEPES-CZB液(HCZB)作為工作液，卵母細(xì)胞在此液中被去掉紡錘體-染色體復(fù)合體；用卵丘細(xì)胞作為核供體。用注射針反復(fù)吸入、吹出卵丘細(xì)胞，以除去其細(xì)胞膜和大部分細(xì)胞質(zhì)，然后用注射針將裸卵的核注入去除紡錘體-染色體復(fù)合體的卵母細(xì)胞中。孤雌胚胎所用的卵母細(xì)胞與用于制備核移植胚胎的卵母細(xì)胞來源相同。孤雌胚胎和核移植胚胎用不含Ca2、卻含10mMSr2和細(xì)胞松弛

小鼠角質(zhì)細(xì)胞的分離和培養(yǎng)2015/08/05: 實(shí)驗(yàn)試劑HBSS：NaCl8g/LKCl400mg/LKH2PO460mg/L無水Na2PO447.86mg/L無水葡萄糖1000mg/LNaHCO3350mg/L實(shí)驗(yàn)材料妊娠期BALB/c小鼠實(shí)驗(yàn)步驟1.將1~2天齡新生裸鼠窒息后，置于培養(yǎng)皿中，用1%碘聚乙烯吡咯烷酮液洗凈裸鼠，流水*沖洗，然后用70%乙醇洗兩次。小鼠應(yīng)立即使用，若待處理的小鼠數(shù)量較多，可置冰上30min。2.去除小鼠的四肢和尾巴。3.將小鼠從尾巴至鼻子的皮膚作一簡單切口，用大鼠牙齒鑷輕輕將整個(gè)身體的皮膚剝下，用一把鑷子夾住身

質(zhì)粒DNA的大量提取、純化及棉花的遺傳轉(zhuǎn)化2015/08/05: 實(shí)驗(yàn)試劑1.STE[0.1mol/LNaCI、10mmol/LTris-HCl(pH8.0),1mmol/LEDTA(pH8.0)]2.溶液I[50mmol/L蔗糖、25mmol/LTris-HCl(pH8.0),10mmol/LEDTA(pH8.0)]3.溶液II(0.4mol/LNaOH和2%SDS等量混勻)4.溶液III(3mol/LKac,pH4.8)5.異丙醇6.4mol/LLiCI7.RNase8.苯酚、酚-氯仿、氯仿9.乙醇實(shí)驗(yàn)設(shè)備1.搖床2.制冰機(jī)3.高速離心機(jī)4.水浴鍋5.超凈

麻醉大鼠動(dòng)脈血壓的測(cè)定（直接測(cè)定法）2015/07/23: 實(shí)驗(yàn)試劑1.20%氨基甲酸乙酯（Urethane）注射液或者1.5%戊巴比妥鈉（PhentobarbitalSodium）注射液2.1%普魯卡因注射液3.0.3%肝素生理鹽水注射液實(shí)驗(yàn)設(shè)備1.常用實(shí)驗(yàn)器械一套2.家兔或者大鼠實(shí)驗(yàn)臺(tái)一個(gè)3.用于家兔或者大鼠的聚乙烯醫(yī)用塑料導(dǎo)管（家兔用導(dǎo)管外徑為2mm，內(nèi)徑為1.5mm；大鼠用導(dǎo)管外徑為1mm，內(nèi)徑為0.8mm）4.壓力換能器及其多通道生理信號(hào)采集記錄儀器實(shí)驗(yàn)材料家兔，體重為2kg左右；大鼠，體重為200～250g左右。實(shí)驗(yàn)步驟1.頸總動(dòng)脈測(cè)量動(dòng)脈血

細(xì)胞傷口愈合實(shí)驗(yàn)2015/07/23: 實(shí)驗(yàn)試劑DMEM培養(yǎng)基胎牛血清PBSBD24孔細(xì)胞培養(yǎng)板Raininpipettips,1ml戊二醛乙醇結(jié)晶紫實(shí)驗(yàn)設(shè)備細(xì)胞培養(yǎng)儀：37°Cand5%CO2實(shí)驗(yàn)材料人MDA-MB-231cell實(shí)驗(yàn)步驟1.細(xì)胞在含有10%FBS的DMEM培養(yǎng)基中生長。2.細(xì)胞以一定密度接種到24孔細(xì)胞培養(yǎng)板中，生長24小時(shí)后，單層細(xì)胞融合度應(yīng)達(dá)到70-80%。3.不要更換培養(yǎng)基。用新的1ml槍頭輕輕的在單層培養(yǎng)細(xì)胞間劃痕，劃痕橫穿過孔，槍頭盡量與板孔的底部垂直，不要傾斜。這樣產(chǎn)生的gap的距離才與槍頭末端的外直徑

細(xì)胞計(jì)數(shù)與存活測(cè)試2015/07/23: 實(shí)驗(yàn)材料0.4%w/vtrypanblue(GibcoBRL15250-061)Erythosinbluishstain取0.1gramErythrosinbluish(SigmaE-9259)及0.05grampreservativemethylparaben(SigmaH-3647)溶于100mlCa/Mgfreesaline血球計(jì)數(shù)盤及蓋玻片(Hemocytometerａndcoverslip)計(jì)數(shù)器(counter)低倍倒立顯微鏡粒子計(jì)數(shù)器(Coultercounter,CoulterE

冷凍組織切片的制作2015/07/08: 實(shí)驗(yàn)試劑液氮，干冰，1％明膠，4％多聚甲醛，PBS，含1％NP-40的PBS，3％BSA／PBS稀釋抗體，辣根過氧化物酶標(biāo)記的二抗，DAB／金屬鹽試劑，3％過氧化氫，0.3％(W／V)氯化鎳貯存液，Harris蘇木精，乙醇實(shí)驗(yàn)設(shè)備載玻片，Whatman1＃濾紙，低倍光學(xué)顯微鏡實(shí)驗(yàn)材料未受損傷的組織實(shí)驗(yàn)步驟1.將未受損傷的組織切剖成小樣本，約lcmXIcmX0.4cm。2.將標(biāo)本放在卡片的一端。標(biāo)記該卡片，將帶有標(biāo)本的一端浸入液氮中。60s后，取出標(biāo)本并放在干冰上。修剪卡片，使其大小剛好比組織塊稍

麻醉家兔、大鼠中心靜脈壓的測(cè)定2015/07/08: 實(shí)驗(yàn)原理中心靜脈壓（centralvenouspressureCVP）是用來反映右心房內(nèi)壓力變化的一個(gè)指標(biāo)。右心房內(nèi)壓力的變化受到兩個(gè)因素的影響：*是上下腔靜脈回流的情況，比如大量失血或者丟失體液而發(fā)生低血容量性休克時(shí)，回心血量明顯減少，右心房內(nèi)壓力會(huì)降低，中心靜脈壓降低；第二是右心室內(nèi)壓力變化的情況，比如肺動(dòng)脈高壓時(shí)，右心室內(nèi)壓也增高，右心房內(nèi)血液進(jìn)入右心室受阻，右心房內(nèi)壓增高，中心靜脈壓增高。實(shí)驗(yàn)試劑1.20%氨基甲酸乙酯注射液或者1.5%戊巴比妥鈉注射液2.1%普魯卡因注射液3.0.3%肝

干擾素的制備及檢測(cè)實(shí)驗(yàn)2015/07/08: 實(shí)驗(yàn)原理干抗素是干擾素誘生劑作用于有關(guān)生物細(xì)胞所產(chǎn)生的一類高活性、多功能蛋白質(zhì)。它從細(xì)胞產(chǎn)生和釋放出來以后，又作用于相應(yīng)的其它同種細(xì)胞，使其獲得抗病毒及抗腫瘤等多方面的免疫力。所謂干擾素誘生劑，是指能誘導(dǎo)有關(guān)生物細(xì)胞產(chǎn)生干擾素的一類物質(zhì)。能誘導(dǎo)有關(guān)生物細(xì)胞產(chǎn)生α和β干擾素者稱甲類干擾素誘生劑，如各種動(dòng)物病毒、細(xì)胞內(nèi)寄生的微生物等；可誘導(dǎo)T細(xì)胞產(chǎn)生γ干擾素的稱為乙類干擾素誘生劑，如脂多糖、鏈球菌毒素、腸毒素A等。在實(shí)際工作中，制備干擾素多采用兩種方法。一是用干擾素誘生劑誘導(dǎo)某些生物細(xì)胞產(chǎn)生干擾素，

煙草轉(zhuǎn)化實(shí)驗(yàn)流程2015/07/08: 實(shí)驗(yàn)材料煙草細(xì)胞：BY-2實(shí)驗(yàn)步驟1.BY-2細(xì)胞培養(yǎng)BY-2細(xì)胞懸浮培養(yǎng)在搖床上，避光，溫度260C，轉(zhuǎn)速130rpm，每7天將1ml細(xì)胞轉(zhuǎn)入20ml新鮮的液體培養(yǎng)基中繼續(xù)培養(yǎng)。BY-2愈傷組織生長在固體培養(yǎng)基上，每3-4周繼代一次。轉(zhuǎn)基因的懸浮細(xì)胞和愈傷組織生長在含相應(yīng)抗生素的培養(yǎng)基中。2.用干轉(zhuǎn)化的農(nóng)桿菌GV3101的準(zhǔn)備(1)接種農(nóng)桿菌單菌落到2ml新鮮的YEB液體培養(yǎng)基中，28“培養(yǎng)過;(2)取200ul培養(yǎng)物加到l0ml新的培養(yǎng)基中繼續(xù)培養(yǎng)3-4小時(shí):(3)'5000rpm,離心5m

單克隆抗體的克隆化方法2015/07/08: 實(shí)驗(yàn)原理經(jīng)過抗體測(cè)定的陽性孔，可以擴(kuò)大培養(yǎng)，進(jìn)行克隆，以得到單個(gè)細(xì)胞的后代分泌單克隆抗體?？寺〉臅r(shí)間一般說來越早越好。因?yàn)樵谶@個(gè)時(shí)期各種雜交瘤細(xì)胞同時(shí)旺盛生長，互相爭奪營養(yǎng)和空間，而產(chǎn)生抗體的細(xì)胞有被淹沒和淘汰的可能。但克隆時(shí)間也不宜太早，太早細(xì)胞性狀不穩(wěn)定，數(shù)量少也易丟失?？寺』年栃噪s交瘤細(xì)胞，經(jīng)過一段時(shí)期培養(yǎng)之后，也還會(huì)因?yàn)榧?xì)胞突變或特定染色體的丟失，使部分細(xì)胞喪失產(chǎn)生抗體的能力，所以需要再次或多次克隆化培養(yǎng)?？寺』螖?shù)的多少由分泌能力強(qiáng)弱和抗原的免疫性強(qiáng)弱而決定。一般說，免疫性強(qiáng)的抗原克

柱離心法純化質(zhì)粒DNA2015/06/25: 實(shí)驗(yàn)原理1.離心柱結(jié)構(gòu)：特殊硅基質(zhì)吸附材料，特異性吸附DNA，而RNA與蛋白質(zhì)穿過。在正常情況下，核酸表面覆蓋了一層由水分子組成的親水薄膜，以維持其水溶性。高濃度鹽離子的加入破壞了核酸表面親水薄膜的相對(duì)有序排列，形成了疏水環(huán)境。在此環(huán)境中，核酸與硅膠膜能有效結(jié)合，而蛋白質(zhì)、代謝產(chǎn)物和其他污染物則不能結(jié)合。2.堿變性抽提的原理是在pH高于12.6的堿性條件下，染色體DNA的氫鍵斷裂，破壞了堿基配對(duì)，導(dǎo)致雙螺旋結(jié)構(gòu)解開而變性，但閉環(huán)的質(zhì)粒DNA鏈由于處于拓?fù)淅p繞狀態(tài)而不能彼此分開。當(dāng)pH調(diào)至中性時(shí)，

轉(zhuǎn)化克隆的篩選和鑒定2015/06/25: 實(shí)驗(yàn)原理利用轉(zhuǎn)化后宿主菌所獲得的抗菌素抗性性狀篩選出獲得質(zhì)粒的菌落克隆。再從這些菌落中鑒定出質(zhì)粒上帶有外源基因插入片段的克隆菌落。實(shí)驗(yàn)試劑1.LB培養(yǎng)基(加抗菌素)2.PCR用試劑3.引物4.質(zhì)粒提取用試劑5.酶切需要的限制性內(nèi)切酶及其緩沖液，70%甘油(70%甘油，0.1mol/LMgSO4，0.025mol/LTris-HClpH8.0)。6.100mg/ml氨芐青霉素實(shí)驗(yàn)設(shè)備1.旋渦混合器2.小鑷子3.微量移液取樣器4.移液器吸頭5.1.5ml微量離心管6.雙面微量離心管架7.干式恒溫氣浴

免疫組織化學(xué)染色方法2015/06/25: 實(shí)驗(yàn)原理免疫細(xì)胞化學(xué)（immunocytochemistry）是根據(jù)免疫學(xué)原理，利用抗體同特定抗原專一結(jié)合，對(duì)抗原進(jìn)行定位測(cè)定的技術(shù)。抗原主要為大分子或與大分子相結(jié)合的小分子；抗體則是由漿細(xì)胞針對(duì)特定的抗原分泌的γ球蛋白。如果將抗體結(jié)合上標(biāo)記物，再與組織中的抗原發(fā)生反應(yīng)，即可在光鏡或電鏡下顯示出該抗原存在于組織中的部位。常用的標(biāo)記物有熒光素和酶。熒光素標(biāo)記的稱為免疫熒光法（immunofluorescenttechnique），常用的螢光素有異硫氰酸熒光素（fluoresceinisothioc

小鼠胸腺細(xì)胞增殖3H-TdR摻入法檢測(cè)IL-1的生物活性2015/06/25: 實(shí)驗(yàn)試劑1.75%酒精2.5%FCS-RPMI-1640*培養(yǎng)液與RPMI-1640*培養(yǎng)液3.ConA或PHA4.IL-1標(biāo)準(zhǔn)品：倍比稀釋成至少6個(gè)不同濃度值。實(shí)驗(yàn)設(shè)備1.3H-TdR、β-液閃汁數(shù)儀，微量細(xì)胞收集儀2.解剖刀、剪、單皿、研磨工具(玻璃勻漿器，不誘鋼網(wǎng)或者毛玻璃片，用于研磨小鼠胸腺)3.96孔細(xì)胞培養(yǎng)板4.刻度吸管，毛細(xì)吸管，刻度離心管、離心機(jī)、細(xì)胞計(jì)數(shù)板，倒置顯微鏡，加樣器(頭)，50%CO2培養(yǎng)箱，超凈工作臺(tái)實(shí)驗(yàn)材料1.小鼠：BALB/C或C57BL/6小鼠，6-10周齡，

大鼠血清、血漿及相關(guān)液體樣本中膽囊收縮素（CCK）含量的測(cè)定2015/06/25: 實(shí)驗(yàn)試劑1.大鼠膽囊收縮素(CCK)定量檢測(cè)試劑盒(ELISA)2.蒸餾水實(shí)驗(yàn)設(shè)備1.37℃恒溫箱2.標(biāo)準(zhǔn)規(guī)格酶標(biāo)儀3.精密移液器及一次性吸頭4.一次性試管5.吸水紙實(shí)驗(yàn)步驟1.準(zhǔn)備：從冰箱取出試劑盒，室溫復(fù)溫平衡30分鐘。2.配液：用蒸餾水將20倍濃縮洗滌液稀釋成原倍的洗滌液。3.加標(biāo)準(zhǔn)品和待測(cè)樣本：取足夠數(shù)量的酶標(biāo)包被板，固定于框架上，分別設(shè)置標(biāo)準(zhǔn)品孔、待測(cè)樣本孔和空白對(duì)照孔，記錄各孔位置，在標(biāo)準(zhǔn)品孔中加入標(biāo)準(zhǔn)品50μL；待測(cè)樣本孔中先加入待測(cè)樣本10μL，再加樣本稀釋液40μL(即樣本稀釋

抗原的制備方法2015/06/08: 實(shí)驗(yàn)步驟一、抗原的提取抗原的制備是一件十分細(xì)致的工作，要制備一個(gè)高純度的抗原，需要付出艱巨的努力，制備工作涉及物理學(xué)、化學(xué)和生理學(xué)等許多領(lǐng)域的知識(shí)。根據(jù)物理或化學(xué)特性建立起來的分離、純化方法的主要原理不外乎科二個(gè)方面：①利用混合物中幾個(gè)組分分配率的差別將他們分配到可用機(jī)械方法分離的兩或幾個(gè)物相中，如鹽析、有機(jī)溶劑抽提、層析和結(jié)晶等；②把混合物置于單一物相中，通過物理力場的作用使各組分分配于不同的區(qū)域而達(dá)到分離的目的，如電泳、超速離心和超濾等。由于組織細(xì)胞內(nèi)存著許多分子結(jié)構(gòu)和理化性質(zhì)不同的抗原物質(zhì)

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