FastBeat Soil DNA Kit (Bead Beating) FastBeat 土壤 DNA 提取試劑he（珠磨法）

超純超快土壤基因組DNA快速提取試劑he

目錄號：40415

v Kit Contents and Storage

v 所有試劑在指ding溫度下儲存時，可穩(wěn)定保存 9 個月。

描述

FastBeat 土壤 DNA 試劑盒可在不到 40 分鐘的時間內(nèi)直接從土壤樣品中快速高效地分離 PCR 即用型基因組 DNA。設(shè)計用于磁珠打漿設(shè)備，例如 MP Biomedicals 的 FastPrep® 儀器，可在 40 秒內(nèi)輕松裂解土壤生物種群。將樣品放入含有 3 種珠子的 2.0 ml 管中，珠子是陶瓷和二氧化硅顆粒的混合物，旨在有效裂解所有土壤生物，包括歷史shang難以溶解的來源，如真細(xì)菌孢子和內(nèi)生孢子、革蘭氏陽性菌、酵母、藻類、線蟲和真菌。

v 該套件使用一種新穎的專有方法來去除高腐植酸含量，包括堆肥、沉積物和糞便等難處理的土壤類型。分離的 DNA 純度高，可以更成功地從樣品中對生物體進(jìn)行 PCR 擴(kuò)增。已經(jīng)進(jìn)行了 PCR 分析以檢測多種生物體，包括細(xì)菌（例如枯草芽孢桿菌、炭疽桿菌）、真菌（例如酵母、霉菌）、藻類和放線菌（例如鏈霉菌）。

v使用前的重要注意事項(xiàng)

向樣品中加入磷酸鈉和 MT 緩沖液后，微珠管中的填充體積應(yīng)在樣品管中留出足夠的空氣空間，以便進(jìn)行高效的 FastPrep® 儀器處理。MP Biomedicals 建議使用 500 mg 起始材料，只要試管中有 250 - 500 μl 的空隙。微珠管過量填充可能導(dǎo)致樣品損失或試管故障。珠管蓋必須牢固，但不能擰得過緊，以防止樣品泄漏。如果樣品太大而無法在單個試管中處理，請分樣并使用多個試管進(jìn)行處理。這些試劑盒已在 FastPrep® 儀器中進(jìn)行了嚴(yán)格測試。在 FastPrep® 儀器中以 6.0 的速度運(yùn)行一次 40 秒就足以裂解幾乎所有樣品。如果用戶通過實(shí)驗(yàn)確定需要額外的處理時間，則應(yīng)在連續(xù)的 FastPrep® 儀器勻漿之間將樣品在微珠管中的冰上孵育至少 2 分鐘If you use other bead beater device, please follow instruction manual from manufaturer to set appropriate parameter for good performance.

操作步驟

e 注意：

1. shou次使用前，將規(guī)定量的乙醇加入PQ溶液瓶中，緩沖WB瓶中，混勻，并在瓶子上打勾。

2.向微珠管中加入多達(dá) 500 mg 的土壤樣品。

3.將980μl磷酸鈉緩沖液添加到磁珠管中的樣品中。溫和的 votex 混合。加入120μl MT 緩沖液。

e 注意：

檢查MT緩沖區(qū)。如果 MT 緩沖液沉淀，請在使用前將溶液加熱至60°C直至溶解。

在 FastPrep® 儀器中以6.0的速度設(shè)置40秒。Centrifuge at 12,000xg for 5minutes to pellet debris.

將上清液轉(zhuǎn)移至干凈的 2.0 ml 離心管中。加入 250 μl PPS 溶液，用手搖動試管 10 次混合。在 4°C 下孵育 5 分鐘。

在室溫下以 10,000 x g 離心管 3 分鐘。避免沉淀，將最多 900 μl 上清液轉(zhuǎn)移到干凈的 2 ml 離心管中，但不超過 900 μl。

加入 300 μl IRS 溶液（1/3 體積）并短暫渦旋。在 4°C 下孵育 5 分鐘。

在室溫下以 10,000 x g 離心管 1 分鐘。避免沉淀，將上清液轉(zhuǎn)移到干凈的 5 ml 離心管中。

向澄清的上清液中加入 1.5 體積的 PQ 溶液，并通過移液混合。

示例：向 1100 μl 裂解物中加入 1650 μl PQ 溶液。如果回收的上清液較少，則相應(yīng)地減少 PQ 溶液的量。加入乙醇后可能會形成沉淀，但這不會影響程序。

注意：確保已將乙醇添加到 PQ 溶液中。

注意：將 PQ 溶液直接滴加到已澄清的上清液中，并立即混勻，這一點(diǎn)很重要。

將約 700 微升混合液加入離心過濾器（置于收集管中），在室溫下以 10,000×g 離心 1 分鐘。棄去濾液。再加入 700 微升，重復(fù)操作，直至所有剩余混合液都加入離心過濾器。
注意：每個樣本處理可能需要 4 至 5 次加載。

向離心過濾器中加入 600 微升 WB 緩沖液，在室溫下以 10,000×g 離心 30 秒。棄去濾液。用另外600微升WB緩沖液重復(fù)步驟 11。

注意：確保向 WB 緩沖液中加入乙醇。

在室溫下以 13000×g 的離心力離心旋轉(zhuǎn)過濾器 2 分鐘，使旋轉(zhuǎn)過濾器干燥。

將離心柱過濾器小心放入干凈的 1.5 毫升離心管中。避免緩沖液 WB 濺到離心柱過濾器上。向柱膜中心加入 100 微升洗脫緩沖液（可選：將水預(yù)熱至 70 - 90 攝氏度可提高 DNA 產(chǎn)量）。在室溫下孵育 3 - 5 分鐘，然后以 13000 x g 離心 1 分鐘以洗脫 DNA。
注意：使用較小體積（最小 30 微升）的洗脫緩沖液可獲得更高濃度。
可選：將洗脫液放回離心柱中再洗脫一次。這可使 DNA 濃度提高約 10 - 15%。

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