2x SYBR Green qPCR Mix（With 100x ROX）

2 x SYBR Green qPCR Mix 熒光定量

目錄號(hào):71519

產(chǎn)品內(nèi)容

保存條件

-20℃保存，有效期 24 個(gè)月, 使用前充分融解，輕柔顛倒混勻。短期使用可放在 4 ℃，避免反復(fù)凍融。

產(chǎn)品簡(jiǎn)介

2x SYBR Green qPCR Mix是SYBR Green I 嵌合染料法專用的qPCR試劑，為2x 預(yù)混液，包含除引物和DNA樣品以外的所有qPCR組分，可減少操作步驟，縮短加樣時(shí)間，降低污染幾率。其核心組分是全新的Hotmaster Taq DNA聚合酶，配合精心優(yōu)化的Buffer體系，有效抑制非特異性擴(kuò)增，可對(duì)寬廣濃度范圍的模板進(jìn)行準(zhǔn)確定量，獲得穩(wěn)定可靠的qPCR結(jié)果，具有靈敏度高、特異性強(qiáng)、穩(wěn)定性好等特點(diǎn)。

本產(chǎn)品含有獨(dú)立包裝參比染料100x ROX（50µmol/µl），用于消除信號(hào)本底以及校正孔與孔之間產(chǎn)生的熒光信號(hào)誤差，不同儀器所需ROX Reference Dye濃度不同，見(jiàn)下表。

快捷用法:

1. 需要高濃度ROX的機(jī)型（終濃度為0.5 µmol/µl）：每1.25ml 2x SYBR Green qPCR mix加入25µl 100x ROX，充分混勻后，可以直接使用。

2. 需要低濃度ROX的機(jī)型（終濃度為0.05 µmol/µl）：每1.25ml 2x SYBR Green qPCR mix加入2.5µl 100x ROX，充分混勻后，可以直接使用。

操作步驟：

1. 將DNA模板、引物、2 x SYBR Green qPCR Mix、RNase-Free H2O溶解并置于冰上備用。

2. 冰上配制qPCR反應(yīng)體系：（以20μl反應(yīng)體系為例）

注意：

1） 推薦模板加樣量為1-2 μl / 20μl反應(yīng)體系，cDNA原液≤總反應(yīng)體系的10%，基因組DNA的量為10 - 100 ng。因不同種類的DNA模板中含有的靶基因拷貝數(shù)不同，可對(duì)模板進(jìn)行梯度稀釋，以確定最佳的模板使用量。

2） 通常推薦引物濃度為0.2 μM，就可以得到較好的結(jié)果，反應(yīng)效果不佳時(shí)可在0.1 - 1.0 μM范圍內(nèi)進(jìn)行調(diào)整。擴(kuò)增效率不高的情況下，可提高引物濃度；發(fā)生非特異性反應(yīng)時(shí)，可降低引物濃度，由此優(yōu)化反應(yīng)體系。

3） 舉例為常規(guī)PCR反應(yīng)體系和反應(yīng)程序，實(shí)際操作中應(yīng)根據(jù)模板、引物結(jié)構(gòu)和目的片段大小不同進(jìn)行相應(yīng)的改進(jìn)和優(yōu)化。
3. qPCR反應(yīng)程序

注意：

1） 本產(chǎn)品兼容性強(qiáng)，絕大多數(shù)情況下使用二步法和三步法均可獲得良好效果。建議采用兩步法qPCR反應(yīng)

程序。一般來(lái)說(shuō)，二步法擴(kuò)增特異性高，三步法擴(kuò)增效率高。如果融鏈曲線較差，可以嘗試兩步法擴(kuò)增

或提高退火溫度；如果因使用Tm值較低的引物等原因，得不到良好的實(shí)驗(yàn)結(jié)果時(shí)，可嘗試加長(zhǎng)延伸時(shí)間或者進(jìn)行三步法PCR擴(kuò)增。

2） 根據(jù)引物的Tm值進(jìn)行退火&延伸（退火）溫度的設(shè)定；

3） 延伸（退火&延伸）時(shí)間的設(shè)置還需要根據(jù)您所使用的qPCR儀所需要的最短數(shù)據(jù)采集時(shí)間自行調(diào)整。

4） 融解曲線分析請(qǐng)以所使用的熒光定量PCR儀推薦的程序進(jìn)行設(shè)定。

2 x SYBR Green qPCR Mix 熒光定量