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產(chǎn)品簡(jiǎn)介

Nuclear Yeast Two-Hybrid Library Construction Kit是一款用于構(gòu)建真核生物的全長(zhǎng)核蛋白酵母雙雜交文庫(kù)的試劑盒，本試劑盒含有三個(gè)改造的PGADT7-S序列載體，分別命名為PGADT7-S1、PGADT7-S2、PGADT7-S3, 三個(gè)載體含有不用的讀碼框閱讀方式，可以方便合成一份相同的雙鏈cDNA構(gòu)建三框文庫(kù)。且改造的PGADT7-S序列載體多克隆上游含有NLS信號(hào)序列，可以把文庫(kù)全部轉(zhuǎn)錄本基因定位到核內(nèi)。本產(chǎn)品適用于起始模板為100 ng-100 μg不同來(lái)源真核生物總RNA樣本。經(jīng)過(guò)mRNA分離、單鏈cDNA合成、雙鏈cDNA合成、雙鏈cDNA分級(jí)純化、小量連接轉(zhuǎn)化確定分級(jí)取舍、大量連接轉(zhuǎn)化。

操作流程

圖1 核蛋白酵母雙雜交文庫(kù)構(gòu)建試劑盒流程原理圖

注意事項(xiàng)

1. 關(guān)于操作

1. 本產(chǎn)品僅作科研用途。

2. 為了您的安全和健康，請(qǐng)穿實(shí)驗(yàn)服并佩戴一次性手套操作。

3. 請(qǐng)于使用前將試劑盒各組分置于室溫解凍。解凍后上下顛倒數(shù)次充分混勻，短暫離心后置于冰上待用。

4. 推薦在帶熱蓋的PCR儀中進(jìn)行各步驟反應(yīng)，使用前應(yīng)預(yù)熱PCR儀至反應(yīng)溫度附近。

5. 請(qǐng)使用無(wú)RNase污染的耗材，并對(duì)實(shí)驗(yàn)區(qū)域定期進(jìn)行清理，推薦使用固相RNA清除劑(翌圣貨號(hào): 10609ES)去除RNA酶污染。

6. PCR產(chǎn)物因操作不當(dāng)極容易產(chǎn)生氣溶膠污染，進(jìn)而影響實(shí)驗(yàn)結(jié)果準(zhǔn)確性。推薦將PCR反應(yīng)體系配制區(qū)和PCR產(chǎn)物純化檢測(cè)區(qū)進(jìn)行強(qiáng)制性的物理隔離；配備文庫(kù)構(gòu)建專用移液器等設(shè)備；定時(shí)對(duì)各實(shí)驗(yàn)區(qū)域進(jìn)行清潔（固相RNA清除劑(翌圣貨號(hào): 10609ES)），以保證實(shí)驗(yàn)環(huán)境的潔凈度。

2. 應(yīng)用范圍

1. 本產(chǎn)品僅作科研用途！

2. 本試劑盒適用于起始模板量為100 ng-75 μg（體積≤100 μL）的高質(zhì)量動(dòng)物、植物和真菌等真核生物的總RNA。如初始RNA濃度偏低，體積超過(guò)100 μL，可使用Hieff NGS® RNA Cleaner磁珠進(jìn)行濃縮。 RNA需通過(guò)Agilent 2100 Bioanalyzer RNA 6000 Nano/Pico芯片檢測(cè)，RIN值要求＞7，以保證mRNA有完整的poly(A)尾結(jié)構(gòu)。

3. 本試劑盒的mRNA分離模塊使用的是oligo (dT)磁珠，只有帶poly(A)尾的mRNA才能被提??；其他不具poly(A)尾的RNA，如非編碼RNA、無(wú)poly(A)尾的mRNA等不能適用本試劑盒。此外，F(xiàn)FPE樣本中的mRNA降解嚴(yán)重，通常無(wú)完整的poly(A)尾結(jié)構(gòu)，故亦無(wú)法使用本試劑盒進(jìn)行建庫(kù)。