LNCap人前列腺癌細胞介紹：

種屬：人；貼壁生長；生長周期：3~4天

細胞傳代方法：1：2傳代。

細胞形態(tài)特性：上皮樣；梭形。

有一些細胞是數(shù)量多一點比較好生長，生長狀態(tài)也比較好。這種一般是屬于生長速度慢的細胞。譬如內(nèi)皮細胞。而有一些是細胞是數(shù)量少一點細胞狀態(tài)會生長的比較好，譬如巨噬細胞和某些腫瘤細胞。尤其是巨噬細胞，生長速度非常得快，貼壁速度很快，所以傳代時就應該留很少量的細胞，這樣細胞狀態(tài)會比較好。并且巨噬細胞比較喜歡扎堆生長，而堆與堆之間是有空間的。如果長成相連在一起的一滿片的時候，細胞形態(tài)基本上就會差了，老化的會比較多，對后期實驗結(jié)果是不好的。所以在養(yǎng)細胞的時候應該摸索該細胞喜歡的生長空間密度問題。這個其實是有一個方法可以改善的。對于貼壁細胞，如果細胞形態(tài)不好，（或者細胞形態(tài)不清晰，表面似有異物等）可以在傳代的時候進行如下操作：

先倒掉舊的培養(yǎng)基，加入3ml新的培養(yǎng)基（有無血清的都可）洗滌一次，用滴管吸走，然后再加入3ml的培養(yǎng)基，進行預吹打，控制吹打力度，輕輕地大概沿著瓶底過一遍，然后吸走。這時侯再開始正式的消化、吹打。（巨噬細胞建議只吹打，不消化）其次，把吹打下來的細胞懸液加入到新的培養(yǎng)瓶內(nèi)，培養(yǎng)瓶事先加入培養(yǎng)基，放入培養(yǎng)箱內(nèi)培養(yǎng)，按時間點觀察細胞貼壁情況。10分鐘觀察一次，20分鐘，30分鐘觀察一次。選擇一個時間點，已經(jīng)有部分細胞貼壁的情況下，重新置于潔凈臺，底面朝上迅速倒出其中的培養(yǎng)基，加入3ml新培養(yǎng)基再輕輕洗一次。然后加入培養(yǎng)基培養(yǎng)。后續(xù)觀察細胞生長情況以及形態(tài)。通常稱之為“二傳”。如果一次效果還不理想，可重復多次。直到找到細胞上乘形態(tài)。其中要注意，結(jié)合細胞喜歡的生長情況。喜歡多一點數(shù)量長得好的細胞你就等貼壁細胞比較多點的時候再傳。反之亦然。

Lncap Cell細胞背景資料：該細胞由HoroszewiczJS于1977年從一名50歲的明確診斷為轉(zhuǎn)移性前列腺癌的白人男性患者的左鎖骨上淋巴結(jié)細針穿刺的活體組織中分離建立的。

LNCap人前列腺癌細胞凍存的步驟：

1）選擇處于對數(shù)生長期的細胞，在凍存前一天建議換液。將多個培養(yǎng)瓶中的細胞培養(yǎng)液去掉，用0.25%YDBM消化。適時去掉YDBM，加入少量新培養(yǎng)液。用吸管吸取培養(yǎng)液反復吹打瓶壁上的細胞，使其成為均勻分散的細胞懸液。懸浮生產(chǎn)細胞則不要消化處理。然后將細胞收集于離心管中離心(1000r/min,10鐘)；

2）去上清液，加入含20%小牛血清的培養(yǎng)基，于4℃預冷15分鐘后，逐滴加入已無菌的DMSO或甘油，用吸管輕輕吹打使細胞均勻，細胞濃度為5*106～1×107/mL之間。(凍存培養(yǎng)液的配置是不是一定要用小牛血清呢？答案是不一定的，具體要看培養(yǎng)的細胞類型來選擇；

3）將分裝上述細胞懸液于2ml凍存管中，每管0.25ml。凍存管要將蓋子蓋緊，并標記好細胞名稱和凍存日期，同時作好登記(日期、細胞種類及代次、凍存支數(shù))；

4）將裝好細胞的凍存管放到凍存盒中，-80℃冰箱過夜。如果有程序降溫器(放在-80℃冰箱過夜，放入液氮罐)或者可以在4℃，2h；然后轉(zhuǎn)到-20℃，2h；-80℃，2h；放入液氮罐；

5）細胞凍存在液氮中可以長期保存，但為妥善起見，凍存半年后，最好取出一只凍存管細胞復蘇培養(yǎng)，觀察生長情況，然后再繼續(xù)凍存。