THP-1人單核細胞白血病THP-1人單核細胞白血病

種屬：人；懸浮生長；生長周期：3~4天

細胞培養(yǎng)條件

培養(yǎng)基：RPMI-1640+10%FBS+0.05 mM β-mercaptoethanol+1%P/S

推薦傳代比例：1:3-1:6，每2-3天換液一次

培養(yǎng)條件：氣相：95%空氣+5%CO2，溫度：37℃

傳代操作

當(dāng)細胞密度達到約8x10^5cells/ml左右時，即可進行傳代。由于是懸浮細胞，可直接將細胞吸出，離心之后傳代。傳代最少濃度不應(yīng)少于1x10^5 cells/ml。

去掉培養(yǎng)皿中的培養(yǎng)基，加入PBS進行沖洗，并去上清;

加入YM進行潤洗，并去上清;

放入CO2培養(yǎng)箱消化2-4min;

加入培養(yǎng)基終止消化，并吹打均勻。

常見問題及解答

• 收貨時細胞出現(xiàn)偽足，或是碎片較多怎么辦？

受到運輸影響，懸浮細胞會短暫性出現(xiàn)形態(tài)改變的現(xiàn)象，如偽足等。通過傳代培養(yǎng)，1周左右可以恢復(fù)正常。一些細胞在運輸途中死亡而產(chǎn)生碎片，通過傳代離心可以去除（見上文傳代篇）。

• 培養(yǎng)過程中細胞發(fā)生貼壁怎么辦？

少量細胞貼壁屬于正常情況，將細胞懸液轉(zhuǎn)移至新瓶中即可。當(dāng)貼壁細胞的比例高于20%，說明細胞生長環(huán)境有異常，需排查培養(yǎng)箱設(shè)置、培養(yǎng)基成分，以及培養(yǎng)器皿是否異常。

• 培養(yǎng)過程中細胞發(fā)生聚團怎么辦？

少量細胞聚團，呈葡萄串狀，屬于正?，F(xiàn)象，特別是細胞密度較低時，易出現(xiàn)這種情況。更換血清品牌或增大血清比例（不超過20%）有助于解決聚團問題。不建議將聚團的細胞吹散，等待密度高時，會自己分散開。

• 培養(yǎng)基里一定要加β-巰基乙醇嗎？

β-巰基乙醇是一種常用的培養(yǎng)補充劑，有抗氧化的作用，可減少氧化應(yīng)激對THP-1細胞的影響。當(dāng)細胞密度過大但需要維持時，可適當(dāng)增加巰基乙醇的比例（不超過標準量的1.5倍）。

• 鏡下觀察時，難以聚焦或估算密度怎么辦？

懸浮細胞會隨著液體流動，不容易聚焦，靜置5-10分鐘使細胞沉底，之后在輕輕放上顯微鏡觀察，將有助于聚焦和估算細胞密度。