β－葡萄糖醛酸苷酶（β-glucuronidase，β-GD）試劑盒說(shuō)明書

微量法 100 管/96 樣

β－葡萄糖醛酸苷酶試劑盒 糖代謝

正式測(cè)定前務(wù)必取 2-3 個(gè)預(yù)期差異較大的樣本做預(yù)測(cè)定測(cè)定意義：

β-GD 廣泛存在于動(dòng)物組織中，是一種參與腫瘤侵襲和轉(zhuǎn)移過(guò)程的基質(zhì)降解酶，具有水解固醇葡萄糖醛suan和酸性粘多糖等生理功能。該酶在肝細(xì)胞中含量較高。此外在胃癌組織中含量豐富，測(cè)定胃液β-GD活性對(duì)于研究胃癌具有重要的意義。

測(cè)定原理：

β-GD 催化苯fen β-D-葡萄糖醛酸產(chǎn)生游離的酚tai，通過(guò)測(cè)定苯fen含量反應(yīng)該酶活性高低。

組成：

試劑二：粉劑×1 瓶，-20℃保存；臨用前加入 2ml 蒸餾水，充分溶解待用；用不完的試劑仍-20℃保存；試劑四：1μmol/ml 標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液 10ml，4℃保存；

自備儀器和用品：

可見(jiàn)分光光度計(jì)/酶標(biāo)儀、水浴鍋、臺(tái)式離心機(jī)、可調(diào)式移液器、微量石英比色皿/96 孔板、研缽、冰和蒸餾水。

樣品測(cè)定的前處理：

按照組織質(zhì)量（g）：提取液體積(ml)為 1：5~10 的比例（建議稱取約 0.1g 組織，加入 1ml 提取液），進(jìn)行冰浴勻漿。8000g 4℃離心 10min，取上清，置冰上待測(cè)。

測(cè)定步驟：

1、分光光度計(jì)預(yù)熱 30min 以上，調(diào)節(jié)波長(zhǎng)至 540nm，蒸餾水調(diào)零。

2、樣本測(cè)定

混勻后，37℃反應(yīng) 30min

混勻， 540nm 下測(cè)定各管吸光值

注意：標(biāo)準(zhǔn)管和空白管只需測(cè)一次。

β-GD 活性計(jì)算：

按樣本鮮重計(jì)算：

單位定義：每小時(shí)每g 鮮重樣品中催化產(chǎn)生 1μmol 酚tai的量為一個(gè)活力單位。

β-GD（μmol/h/g 鮮重）= (C 標(biāo)準(zhǔn)管×V1)×（A 測(cè)定管-A 空白管）÷（A 標(biāo)準(zhǔn)管-A 空白管）÷(W×V1÷V2)÷T=2×

（A 測(cè)定管-A 空白管）÷（A 標(biāo)準(zhǔn)管-A 空白管）÷W

按樣本蛋白濃度計(jì)算：

單位定義：每小時(shí)每mg 組織蛋白催化產(chǎn)生 1μmol 酚tai的量為一個(gè)活力單位。

β-GD（μmol/h/mg prot）= (C 標(biāo)準(zhǔn)管×V1)×（A 測(cè)定管-A 空白管）÷（A 標(biāo)準(zhǔn)管-A 空白管）÷(V1×Cpr)÷T=2×

（A 測(cè)定管-A 空白管）÷（A 標(biāo)準(zhǔn)管-A 空白管）÷Cpr

C 標(biāo)準(zhǔn)管：標(biāo)準(zhǔn)管濃度， 1μmol/ml；V1：加入樣本體積：0.01ml；V2：加入提取液體積，1ml；T：反應(yīng)時(shí)間，0.5h；Cpr：樣本蛋白質(zhì)濃度，mg/ml；W：樣本鮮重，g。

β－葡萄糖醛酸苷酶試劑盒 糖代謝