胃蛋bai酶（Pepsin）試劑盒說(shuō)明書(shū)

分光光度法 50 管/24 樣

胃蛋bai酶Pepsin試劑盒

正式測(cè)定前務(wù)必取 2-3 個(gè)預(yù)期差異較大的樣本做預(yù)測(cè)定測(cè)定意義：

胃蛋bai酶由胃粘膜主細(xì)胞分泌，分解食物中蛋白質(zhì)成小肽段。一般用于神經(jīng)性低酸癥的鑒別，慢性胃炎、慢性胃擴(kuò)張、慢性十二指腸炎等癥狀時(shí)也會(huì)引起胃蛋bai酶分泌的減少。

測(cè)定原理：

胃蛋bai酶可催化血紅蛋白水解，水解產(chǎn)物與福林試劑反應(yīng)后顯藍(lán)色；一定范圍內(nèi)，其顏色的深淺與胃蛋bai酶活性呈正比。

組成：

試劑三：粉劑×1 瓶，4℃避光保存。臨用前加入 25 ml 試劑二充分溶解。試劑四：粉劑×1 瓶，4℃保存。臨用前加入 25 ml 蒸餾水充分溶解。

試劑五：粉劑×1 瓶，4℃保存。臨用前加入 30 ml 蒸餾水充分溶解。

標(biāo)準(zhǔn)品：液體 1.26ml×1 支，0.5 μ mol/ml 酪an酸標(biāo)準(zhǔn)溶液濃度 4℃保存。

自備儀器和用品：

可見(jiàn)分光光度計(jì)、臺(tái)式離心機(jī)、水浴鍋、可調(diào)式移液器、1ml 玻璃比色皿、研缽、冰和蒸餾水。

粗酶液提取：

組織樣品：按照組織質(zhì)量（g）：試劑一體積(ml)為 1：5~10 的比例（建議稱(chēng)取約 0.1g 組織，加入 1ml 試劑一）冰浴勻漿，8000g，4℃離心 10min，取上清，即粗酶液。

測(cè)定步驟：

分光光度計(jì)預(yù)熱 30min，調(diào)節(jié)波長(zhǎng)到 580 nm，蒸餾水調(diào)零。

試劑三和試劑四置于 37℃水浴預(yù)熱 30min。

標(biāo)準(zhǔn)管：取玻璃比色皿，加入 100μL 標(biāo)準(zhǔn)品，200μL 試劑二，600μL 試劑五，100μL 試劑六，混勻后室溫靜置 20min，于 580 nm 測(cè)光吸收，記為 A 標(biāo)準(zhǔn)管。

空白管：取玻璃比色皿，加入 100μL 蒸餾水，200μL 試劑二，600μL 試劑五，100μL 試劑六，混勻后室溫靜置 20min，于 580 nm 測(cè)光吸收，記為 A 空白管。

對(duì)照管：取EP 管，加入 500 μL 蒸餾水，置于 37℃水浴保溫 10min；加入 500μL 試劑四，蓋緊后搖勻1min；加入 100μL 粗酶液，混勻后 8000g 4℃離心 10 分鐘取上清；在玻璃比色皿中加入上清液 100μL，再加入 200μL 試劑二，600μL 試劑五，100μL 試劑六，混勻后室溫靜置 20min，于 580 nm 測(cè)光吸收，記為A對(duì)照管。

測(cè)定管：取EP 管，加入 100μL 粗酶液，500 μL 試劑三，置于 37℃水浴保溫 10min；加入 500μL 試劑四，蓋緊后搖勻 1min；8000g 4℃離心 10 分鐘取上清；在玻璃比色皿中加入上清液 100μL，再加入 200μL試劑二，600μL 試劑五，100μL 試劑六，混勻后室溫靜置 20min，于 580 nm 測(cè)光吸收，記為 A 測(cè)定管。

注意：空白管和標(biāo)準(zhǔn)管只需要測(cè)定一次。

計(jì)算公式：

(1) 按照蛋白濃度計(jì)算

活性單位定義：37℃每毫克蛋白每分鐘催化血紅蛋白水解生成 1nmol 酪an酸為 1 個(gè)酶活單位。

胃蛋bai酶活性（nmol/min/mg prot）=C 標(biāo)準(zhǔn)品×（A 測(cè)定管－A 對(duì)照管）÷（A 標(biāo)準(zhǔn)管－A 空白管）×稀釋倍數(shù)÷（Cpr×V1）÷T=5500×（A 測(cè)定管－A 對(duì)照管）÷（A 標(biāo)準(zhǔn)管－A 空白管）÷Cpr

C 標(biāo)準(zhǔn)品：標(biāo)準(zhǔn)品濃度，0.5 μ mol/ml 酪an酸；稀釋倍數(shù)：（100+500+500）÷100=11；Cpr：粗酶液蛋白質(zhì)濃度（mg/ml），需要另外測(cè)定；V1：加入反應(yīng)體系中粗酶液體積（ml），100μl=0.1 ml；T：催化反應(yīng)時(shí)間（min），10min。

（2）按照樣本質(zhì)量計(jì)算

活性單位定義：37℃每克組織每分鐘催化血紅蛋白水解生成 1nmol 酪an酸為 1 個(gè)酶活單位。

胃蛋bai酶活性（nmol/min/g 鮮重）=C 標(biāo)準(zhǔn)品×（A 測(cè)定管－A 對(duì)照管）÷（A 標(biāo)準(zhǔn)管－A 空白管）×稀釋倍數(shù)÷（W×V1÷V2）÷T=5500×（A 測(cè)定管－A 對(duì)照管）÷（A 標(biāo)準(zhǔn)管－A 空白管）÷W

C 標(biāo)準(zhǔn)品：標(biāo)準(zhǔn)品濃度，0.5 μ mol/ml 酪an酸；稀釋倍數(shù)：（100+500+500）÷100=11；W：組織質(zhì)量（g）； V1：加入反應(yīng)體系中粗酶液體積（ml），100μl= 0.1 ml；V2：粗酶液總體積（ml），1ml；T：催化反應(yīng) 時(shí)間（min），10min。

注意事項(xiàng):

試劑三、試劑四、試劑五臨用前配制，配制好用不完的試劑 4℃可保存一周。