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產(chǎn)品簡(jiǎn)介：

本產(chǎn)品是在 BCA 法蛋白定量試劑盒基礎(chǔ)上改進(jìn)的超敏蛋白定量試劑盒，尤其適合對(duì)低濃度的蛋白質(zhì)溶液進(jìn)行定量分析。其原理是蛋白質(zhì)分子在堿性條件下將二價(jià) Cu 離子還原為一價(jià) Cu 離子 (雙縮脈反應(yīng)) ，一個(gè)一價(jià) Cu 離子再與二個(gè) BCA 分子鰲合產(chǎn)生一種在吸收波長(zhǎng)為 562 nm 的紫色水溶性產(chǎn)物，根據(jù)紫色水溶性產(chǎn)物的濃度反推出蛋白質(zhì)的濃度。BCA 法原理示意圖如下：

產(chǎn)品特點(diǎn)：

1.超敏感，最-低檢測(cè)濃度為 0.5 μg/mL。

2.線性范圍在 0.5～20 μg/mL，尤其適用于低濃度的樣品。

3.對(duì)大多數(shù)離子型和非離子型去污劑不敏感，但對(duì) Cu 的還原劑和螯合劑敏感。

4.比 Lowry 法更加簡(jiǎn)單快捷，45 分鐘內(nèi)完成測(cè)定。

5.試劑穩(wěn)定，但工作液 1 天內(nèi)有效。

6.終產(chǎn)物穩(wěn)定，檢測(cè)不同蛋白質(zhì)分子的變異系數(shù)遠(yuǎn)小于考馬斯亮藍(lán)法蛋白定量。

7.最短可以檢測(cè)雙肽，所以適合于分子量較小的蛋白質(zhì)，而 Bradford 法需要一定大小的蛋白質(zhì)。

8.本產(chǎn)品不能用于測(cè)定含有DTT 等還原劑的蛋白溶液。

9.蛋白濃度測(cè)定試劑盒（BCA 超敏法）只能用于科研。

產(chǎn)品參數(shù)：

產(chǎn)品規(guī)格

保存和運(yùn)輸

常溫運(yùn)輸和保存，但 BSA 標(biāo)準(zhǔn)品需要低溫運(yùn)輸，-20℃保存，有效期一年。

自備試劑

樣品緩沖液

使用方法：

1. 用合適的方法制備待測(cè)蛋白樣品，并把蛋白質(zhì)溶解在合適的樣品緩沖液中。本檢測(cè)方法受待測(cè)樣品中螯合劑和還原劑的影響，所以需確保待測(cè)蛋白溶液中 EDTA 的終濃度不高于 10 mM、二硫蘇糖醇不高于 1 mM、β-巰基乙醇不高于 1 mM，沒有任何 EGTA。如果達(dá)不達(dá)上述要求，則需要稀釋樣品，使其濃度降低到上述濃度之下。

2.將本試劑盒提供的 BSA 標(biāo)準(zhǔn)品（2 mg/mL）10 μL 和 490 μL 自備的樣品緩沖液（用于溶解待測(cè)樣品的溶液）混合，得到 500 μL 濃度為 0.04 μg/μL 的 BSA工作液，放冰上待用，用于制備標(biāo)準(zhǔn)曲線。上述量足夠一次實(shí)驗(yàn)使用。此 BSA 工作液每次實(shí)驗(yàn)均需要新鮮配制。

3.配制超敏 BCA 工作液：先計(jì)算一次檢測(cè)所需 BSA 工作液的體積。如果有 N 個(gè)樣品，每個(gè)樣品只做一次重復(fù)，再加上 7 個(gè)標(biāo)準(zhǔn)曲線樣品，一般多準(zhǔn)備 10%的量， 故一次檢測(cè)所需 BSA 工作液的體積為：0.15 mL×（N+7）×110%。配制時(shí)將超敏型 BCA 蛋白定量溶液A、超敏型 BCA 蛋白定量溶液B 和超敏型 BCA 蛋白定量溶液 C 按 50：48：2 的比例混合得到到所需體積即可。如果需要 10 mL，則三種溶液體積分別為 5 mL、4.8 mL、0.2 mL，所得溶液即超敏 BCA 工作液。

4.取一塊 96 孔板，按下表加入上步新鮮制備的 BSA 工作液、N 個(gè)待測(cè)蛋白樣品和自備樣品緩沖液：

5.在每個(gè)孔中（總體積為 150 μL）加入等體積的超敏 BCA 工作液并混勻。如果用排槍加入并混勻則更好。也可把 96 孔板放在振蕩器上振蕩 30 秒混勻。

6.60℃放置 1 小時(shí)。本試劑受溫度和時(shí)間影響較大，故需要準(zhǔn)確定時(shí)和定溫，以保證精確定量。

7.冷至室溫，迅速在 562 nm 下比色測(cè)定所有樣品的光吸收。如酶標(biāo)儀沒有 562 nm的設(shè)定，可用接近的波長(zhǎng)檢測(cè)，如 570 nm。測(cè)定操作最好在 10 分鐘內(nèi)完成，否則化學(xué)反應(yīng)還在繼續(xù)進(jìn)行，光吸收值每 10 分鐘會(huì)升高 2.5%左右。

8.處理數(shù)據(jù)：將編號(hào)為 0 號(hào)的樣品（對(duì)照）的讀數(shù)從其余所有樣品（包括 0 號(hào)樣品， 其讀數(shù)變成零）中扣除。

9.制作標(biāo)準(zhǔn)曲線：以 0-7 號(hào)樣品的 BSA 含量（單位μg，見上表最右行）為橫坐標(biāo)，

0-7 號(hào)樣品吸光值（扣除背景讀數(shù)的）為縱坐標(biāo)，繪出BSA 的標(biāo)準(zhǔn)曲線。

10.再將 N 個(gè)待測(cè)樣品的吸光值（減去 0 號(hào)樣品的讀數(shù)后）標(biāo)在標(biāo)準(zhǔn)曲線上，其在橫坐標(biāo)上對(duì)應(yīng)的蛋白含量（μg）就是待測(cè)樣品中的蛋白質(zhì)含量，除以樣品稀釋液總體積（20 μL），乘以樣品稀釋倍數(shù)即為樣品實(shí)際濃度，單位為 μg/μL。

二：注意事項(xiàng)

11.第 5 步加 BCA 工作液后也可以在室溫放置 2 小時(shí)，或 60℃放置 30 分鐘。超敏BCA 法測(cè)定蛋白濃度時(shí)，吸光度會(huì)隨著時(shí)間的延長(zhǎng)不斷加深。并且顯色反應(yīng)會(huì)因溫度升高而加快。所以，如果蛋白質(zhì)濃度較低，可以改在 60℃孵育 60 分鐘。

12.待測(cè)樣品濃度在 20～2000 μg/mL 范圍時(shí)有較好的線性關(guān)系。

13.超敏 BCA 法測(cè)定蛋白濃度時(shí)，不受下列化學(xué)物質(zhì)的影響：

名稱濃度小于下面數(shù)值時(shí)不受影響

Ammonium Sulfate1.5 M

Brij-355.0%

CHAPS5.0%

EDTA10 mM

Hepes100 mM

Glycine, pH 2.8100 mM

Guanidine HCl4.0 M

Tween 20、60、805.0%

SDS5.0%

Sodium Acetate pH 5.5200 mM

Sodium Chloride (NaCl)1.0 M

Sucrose40%

Sodium Hydroxide (NaOH)0.1 M

NP-405.0%

Triton X-1005.0%

Urea3.0 M

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