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產(chǎn)品簡(jiǎn)介：

Bradford 法測(cè)定蛋白質(zhì)濃度是最為常用的蛋白檢測(cè)方法之一，在酸性條件下，考馬斯亮藍(lán)（Coomassie G-250）染料能與蛋白質(zhì)結(jié)合形成復(fù)合物，其最大吸光值也由 465nm 轉(zhuǎn)移到 595nm，通過(guò)顏色的強(qiáng)弱即可測(cè)定蛋白質(zhì)濃度的高低。SDS-PAGE 電泳凝膠是蛋白電泳的常用凝膠系統(tǒng)，為適配該系統(tǒng)，本品在經(jīng)典 Bradford 法基礎(chǔ)上做了改進(jìn)，使得改良 Bradford 法與 SDS-PAGE 上樣液兼容。

產(chǎn)品特點(diǎn)：

1.與 SDS-PAGE 上樣液兼容。

2.快速，10-20 個(gè)樣品只需要 10 分鐘即可完成測(cè)定。

3.穩(wěn)定，加樣混勻后 2 分鐘既可測(cè)定，1 小時(shí)內(nèi)吸光度變化不超過(guò) 10%。

4.線性范圍在 50～1000µg/mL。

5.最小測(cè)量體積為 1-20µL，最-低測(cè)量蛋白量為 0.5µg。

6.即開(kāi)即用，不需要單獨(dú)購(gòu)買(mǎi)每個(gè)成分再配制。

7.有常規(guī)和微量?jī)煞N檢測(cè)模式。

8.不受絕大部分樣品中的化學(xué)物質(zhì)的影響。巰基乙醇的濃度可高達(dá) 1M，二硫蘇糖醇的濃度可高達(dá) 5mM。

9.受略高濃度的表面活性劑影響，各種蛋白質(zhì)與染料的結(jié)合效率可能有差異。

10.本產(chǎn)品至少可以按常規(guī)法測(cè) 200 次，按微量法測(cè) 1000 次。

11. 本產(chǎn)品只能用于科研。

產(chǎn)品參數(shù)：

產(chǎn)品規(guī)格

保存和運(yùn)輸

常溫運(yùn)輸及保存，有效期一年。

自備試劑

超純水、分光光度計(jì)、定性濾紙

使用方法：

一、制備溶液 A 工作液

1.將試劑盒提供的 Bradford 法蛋白定量溶液 A 與自備超純水按 1：4 比例充分混合即為溶液 A 工作液(例：4mL 溶液 A+16mL 超純水=20mL 溶液 A 工作液)。每次配制多少取決于檢測(cè)方法和測(cè)試體積，需要預(yù)先按下面手冊(cè)計(jì)算。

2.用本試劑盒提供的濾紙過(guò)濾溶液 A 工作液。過(guò)濾后的工作液室溫條件下可穩(wěn)定使用 1-2 星期。注意：不同型號(hào)、規(guī)格的濾紙，具有不同的孔徑，導(dǎo)致可通過(guò)的分子各不相同。請(qǐng)使用本公司指-定提供的濾紙，否則會(huì)導(dǎo)致不同的測(cè)  定結(jié)果。

二、制備 BSA 標(biāo)準(zhǔn)品梯度稀釋液

3.測(cè)試開(kāi)始之前，應(yīng)首先制備 BSA 標(biāo)準(zhǔn)品梯度稀釋液。本試劑盒使用 BSA 作為標(biāo)準(zhǔn)品。用戶(hù)也可以使用自備的其他蛋白質(zhì)濃度測(cè)定用標(biāo)準(zhǔn)品。每個(gè)濃度  具體需要多少體積取決于檢測(cè)方法和測(cè)試體積，需要預(yù)先按下面的手冊(cè)計(jì)  算。沒(méi)有用完的 BSA 標(biāo)準(zhǔn)品梯度稀釋液可以放-20℃待下次使用。

如果進(jìn)行常規(guī)檢測(cè)，建議用溶解待測(cè)樣品的緩沖液將 BSA（2mg/mL）稀釋成下面的 8 個(gè)濃度：

0µg/mL、31.25µg/mL、62.5µg/mL、125µg/mL、250µg/mL、 500µg/mL、750µg/mL、1000µg/mL

如果進(jìn)行微量檢測(cè)，建議用溶解待測(cè)樣品的緩沖液將 BSA（2mg/mL） 稀釋成下面的 6 個(gè)濃度：

0µg/mL、2.5µg/mL、5µg/mL、7.5µg/mL、10µg/mL、20µg/mL。

三、常規(guī)檢測(cè)流程

常規(guī)檢測(cè)法在蛋白濃度30-1000µg/mL 范圍內(nèi)呈現(xiàn)R2=0.996 的直線線性

回歸，可精確定量蛋白濃度在此范圍內(nèi)的蛋白樣品。

4.在標(biāo)記的離心管中分別加入 N 個(gè)待測(cè)蛋白樣品和 8 個(gè) BSA 梯度稀釋液，然后再在每個(gè)離心管中按 1:50 的比例加入溶液 A 工作液。終體積多少取決于比色杯的體積。

如果用 3mL 比色杯檢測(cè)，則取 100µL 樣品+5mL 溶液 A 工作液； 如果用 1mL 比色杯檢測(cè)，則取 40µL 樣品+2mL 溶液 A 工作液； 如果用平底透明 96 孔板，則取 20µL 樣品+1mL 溶液 A 工作液。

5.樣品與溶液 A 工作液混合后，充分震蕩 30 秒混勻。

6.室溫放置 5 分鐘。

7.分光光度計(jì)檢測(cè)吸光度。波長(zhǎng)設(shè)定=595nm。用 96 孔板測(cè)定時(shí)，應(yīng)確保沒(méi)有氣泡，否則氣泡會(huì)絕對(duì)增加吸光度的讀數(shù)。

8.將待測(cè)樣品的測(cè)定值逐一跟用 BSA 梯度稀釋液測(cè)定值繪制的標(biāo)準(zhǔn)曲線比較得到待測(cè)樣品的蛋白質(zhì)濃度。

四、微量檢測(cè)流程

此方法在蛋白濃度 1～20µg/mL 范圍內(nèi)呈現(xiàn) R2=0.992 的直線線性回歸，可精確定量蛋白濃度在此范圍內(nèi)的蛋白樣品。

9.在標(biāo)記的離心管中分別加入 N 個(gè)待測(cè)蛋白樣品和 6 個(gè) BSA 梯度稀釋液，然后再在每個(gè)離心管中按 4:1 的比例（注意：不是 1:50）加入溶液 A 工作液。終體積多少取決于比色杯的體積。

如果用 3mL 比色杯檢測(cè)，則取 4mL 樣品+1mL 溶液 A 工作液； 如果用 1mL 比色杯檢測(cè)，則取 2mL 樣品+0.5mL 溶液 A 工作液；

10.如果用平底透明 96 孔板，則取 400µL 樣品+100µL 溶液 A 工作液。樣品與溶液 A 工作液混合后，充分震蕩 30 秒混勻。

11.室溫放置 5 分鐘。

12.分光光度計(jì)檢測(cè)吸光度。波長(zhǎng)設(shè)定=595nm。用 96 孔板測(cè)定時(shí)，應(yīng)確保沒(méi)有氣泡，否則氣泡會(huì)絕對(duì)增加吸光度的讀數(shù)。

13.將待測(cè)樣品的測(cè)定值逐一跟用 BSA 梯度稀釋液測(cè)定值繪制的標(biāo)準(zhǔn)曲線比較得到待測(cè)樣品的蛋白質(zhì)濃度。

選擇我們的改良Bradford法蛋白定量試劑盒，就是選擇精準(zhǔn)、高效、可靠的檢測(cè)方案，為您的科研實(shí)驗(yàn)保駕護(hù)航！