目錄:上海烜雅生物科技有限公司>>分子生物學(xué)試劑>>試劑盒>> 無縫克隆試劑盒
參考價(jià) | ¥ 500 |
訂貨量 | ≥1盒 |
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更新時(shí)間:2025-04-18 13:56:51瀏覽次數(shù):67評(píng)價(jià)
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供貨周期 | 現(xiàn)貨 | 規(guī)格 | 20次 |
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貨號(hào) | XY-D-1609 | 應(yīng)用領(lǐng)域 | 化工,生物產(chǎn)業(yè) |
主要用途 | 科研 | 英文名稱 | Seamless Cloning and Assembly Kit |
保存條件 | -20℃ | 有效期 | 12個(gè)月 |
產(chǎn)品簡(jiǎn)介:
無縫克隆是一種簡(jiǎn)單、快速、高效的 DNA 定向克隆技術(shù),該技術(shù)突破傳統(tǒng), 不依賴內(nèi)切酶和連接酶,不受限制性內(nèi)切酶酶切位點(diǎn)的限制,利用同源重組的原理,可將任何 DNA 片段克隆至任何載體的任何位點(diǎn)。反應(yīng)及轉(zhuǎn)化時(shí)間短,陽性率達(dá) 95%以上。此反應(yīng)的示意圖如下:
產(chǎn)品特點(diǎn):
1.簡(jiǎn)單、高效地定向克隆 DNA 片段。
2.可同時(shí)定向克隆兩個(gè)或多個(gè) DNA 片段。
3.不依賴內(nèi)切酶和連接酶,不受限制性內(nèi)切酶酶切位點(diǎn)的限制。
4.省時(shí),反應(yīng)時(shí)間加轉(zhuǎn)化時(shí)間短至 20 分鐘。
5.PCR 產(chǎn)物(僅有目的條帶、無非特異條帶和引物二聚體)可直接進(jìn)行重組反應(yīng),無需純化。
6.本產(chǎn)品足夠 20 次 20μL 體系的無縫克隆。
7.無縫克隆試劑盒只能用于科研。
產(chǎn)品參數(shù):
產(chǎn)品規(guī)格
成分 | 規(guī)格 | 包裝 |
2×無縫克隆 Mix | 200ul | 1.5 mL 本色管 |
超純水 | 1ml | 1.5mL 黃蓋管 |
使用手冊(cè) | 1份 | 無 |
保存和運(yùn)輸
低溫運(yùn)輸,-20℃保存,有效期一年。
自備試劑
線性化載體、DNA 片段、感受態(tài)細(xì)胞、SOC 或 LB 培養(yǎng)基和培養(yǎng)皿(含抗菌素和不含的)
使用方法:
一、線性化載體的制備:
可通過單酶切、雙酶切或 PCR 擴(kuò)增的方法來制備。(如果線性化不徹-底,將會(huì)導(dǎo)致陰性克隆的產(chǎn)生,推薦使用雙酶切或 PCR 擴(kuò)增的方法。)
二、DNA 片段的制備:
1. DNA 片段可通過 PCR 擴(kuò)增或酶切的方法制備,PCR 擴(kuò)增片段無需純化即可用于重組反應(yīng)。
2.PCR 擴(kuò)增法引物設(shè)計(jì)原則:引物的 3’端必須包含 18-50 個(gè)能與模板 DNA 結(jié)合的堿基序列,以便 PCR 擴(kuò)增出目的 DNA 片段。引物的 5’端必須包含15-80 個(gè)與線性化載體末端同源的堿基序列,以便 PCR 擴(kuò)增片段能與線性化載體進(jìn)行重組反應(yīng)。
三、重組反應(yīng):
3.按照如下體系操作:
4.50℃反應(yīng) 20 分鐘,然后將離心管放置于冰上 2 分鐘。如當(dāng)天不進(jìn)行轉(zhuǎn)化實(shí)驗(yàn),請(qǐng)將連接產(chǎn)物放-20℃保存。
四、轉(zhuǎn)化:
5.取 4 μL 連接液至 50-100 μL 剛剛?cè)诨母惺軕B(tài)細(xì)胞中,輕輕混勻,冰浴 30分鐘。
6.42℃水浴熱激 90 秒。
7.立即放置于冰上靜置 5 分鐘。
8.加入 500 μL 無菌 SOC 或 LB 培養(yǎng)基(不含抗生素),37℃,200-250 rpm振蕩培養(yǎng) 45-60 分鐘。
9.吸取 200 μL 菌液涂板,為得到更多克隆,可先 4000 rpm 離心 3 分鐘,棄掉部分上清,用移液器輕吹菌體,至充分懸浮,取全部菌液涂板,然后 37℃ 培養(yǎng)過夜(12-16 小時(shí))。
10.用菌落 PCR、直接測(cè)序或其他方法鑒定重組子。
選擇我們的無縫克隆試劑盒,就是選擇精準(zhǔn)、高效、可靠的檢測(cè)方案,為您的科研實(shí)驗(yàn)保駕護(hù)航!
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