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目錄:上海烜雅生物科技有限公司>>分子生物學(xué)試劑>>試劑盒>> 無縫克隆試劑盒

無縫克隆試劑盒
  • 無縫克隆試劑盒
參考價(jià) 500
訂貨量 ≥1
具體成交價(jià)以合同協(xié)議為準(zhǔn)
500
≥1
具體成交價(jià)以合同協(xié)議為準(zhǔn)
  • 品牌 烜雅生物
  • 型號(hào)
  • 廠商性質(zhì) 生產(chǎn)商
  • 所在地 上海市
屬性

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更新時(shí)間:2025-04-18 13:56:51瀏覽次數(shù):67評(píng)價(jià)

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供貨周期 現(xiàn)貨 規(guī)格 20次
貨號(hào) XY-D-1609 應(yīng)用領(lǐng)域 化工,生物產(chǎn)業(yè)
主要用途 科研 英文名稱 Seamless Cloning and Assembly Kit
保存條件 -20℃ 有效期 12個(gè)月
無縫克隆試劑盒,不依賴內(nèi)切酶和連接酶,不受限制性內(nèi)切酶酶切位點(diǎn)的限制。本產(chǎn)品足夠 20 次 20μL 體系的無縫克隆。

產(chǎn)品簡(jiǎn)介:

無縫克隆是一種簡(jiǎn)單、快速、高效的 DNA 定向克隆技術(shù),該技術(shù)突破傳統(tǒng), 不依賴內(nèi)切酶和連接酶,不受限制性內(nèi)切酶酶切位點(diǎn)的限制,利用同源重組的原理,可將任何 DNA 片段克隆至任何載體的任何位點(diǎn)。反應(yīng)及轉(zhuǎn)化時(shí)間短,陽性率達(dá) 95%以上。此反應(yīng)的示意圖如下:無縫克隆試劑盒

產(chǎn)品特點(diǎn):

1.簡(jiǎn)單、高效地定向克隆 DNA 片段。

2.可同時(shí)定向克隆兩個(gè)或多個(gè) DNA 片段。

3.不依賴內(nèi)切酶和連接酶,不受限制性內(nèi)切酶酶切位點(diǎn)的限制。

4.省時(shí),反應(yīng)時(shí)間加轉(zhuǎn)化時(shí)間短至 20 分鐘。

5.PCR 產(chǎn)物(僅有目的條帶、無非特異條帶和引物二聚體)可直接進(jìn)行重組反應(yīng),無需純化。

6.本產(chǎn)品足夠 20 次 20μL 體系的無縫克隆。

7.無縫克隆試劑盒只能用于科研。


產(chǎn)品參數(shù):

產(chǎn)品規(guī)格

成分規(guī)格包裝

2×無縫克隆 Mix

200ul

1.5 mL 本色管

超純水

1ml

1.5mL 黃蓋管
使用手冊(cè)1份





保存和運(yùn)輸

低溫運(yùn)輸,-20℃保存,有效期一年。

自備試劑

線性化載體、DNA 片段、感受態(tài)細(xì)胞、SOC 或 LB 培養(yǎng)基和培養(yǎng)皿(含抗菌素和不含的)


使用方法:

一、線性化載體的制備:

可通過單酶切、雙酶切或 PCR 擴(kuò)增的方法來制備。(如果線性化不徹-底,將會(huì)導(dǎo)致陰性克隆的產(chǎn)生,推薦使用雙酶切或 PCR 擴(kuò)增的方法。)

二、DNA 片段的制備:

1. DNA 片段可通過 PCR 擴(kuò)增或酶切的方法制備,PCR 擴(kuò)增片段無需純化即可用于重組反應(yīng)。

2.PCR 擴(kuò)增法引物設(shè)計(jì)原則:引物的 3’端必須包含 18-50 個(gè)能與模板 DNA 結(jié)合的堿基序列,以便 PCR 擴(kuò)增出目的 DNA 片段。引物的 5’端必須包含15-80 個(gè)與線性化載體末端同源的堿基序列,以便 PCR 擴(kuò)增片段能與線性化載體進(jìn)行重組反應(yīng)。

三、重組反應(yīng):

3.按照如下體系操作:

4.50℃反應(yīng) 20 分鐘,然后將離心管放置于冰上 2 分鐘。如當(dāng)天不進(jìn)行轉(zhuǎn)化實(shí)驗(yàn),請(qǐng)將連接產(chǎn)物放-20℃保存。

四、轉(zhuǎn)化:

5.取 4 μL 連接液至 50-100 μL 剛剛?cè)诨母惺軕B(tài)細(xì)胞中,輕輕混勻,冰浴 30分鐘。

6.42℃水浴熱激 90 秒。

7.立即放置于冰上靜置 5 分鐘。

8.加入 500 μL 無菌 SOC 或 LB 培養(yǎng)基(不含抗生素),37℃,200-250 rpm振蕩培養(yǎng) 45-60 分鐘。

9.吸取 200 μL 菌液涂板,為得到更多克隆,可先 4000 rpm 離心 3 分鐘,棄掉部分上清,用移液器輕吹菌體,至充分懸浮,取全部菌液涂板,然后 37℃ 培養(yǎng)過夜(12-16 小時(shí))。

10.用菌落 PCR、直接測(cè)序或其他方法鑒定重組子。


選擇我們的無縫克隆試劑盒,就是選擇精準(zhǔn)、高效、可靠的檢測(cè)方案,為您的科研實(shí)驗(yàn)保駕護(hù)航!

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