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目錄:上海烜雅生物科技有限公司>>分子生物學(xué)試劑>>試劑盒>> 酵母化學(xué)感受態(tài)細(xì)胞制備試劑盒

酵母化學(xué)感受態(tài)細(xì)胞制備試劑盒
  • 酵母化學(xué)感受態(tài)細(xì)胞制備試劑盒
參考價 1000
訂貨量 ≥1
具體成交價以合同協(xié)議為準(zhǔn)
1000
≥1
具體成交價以合同協(xié)議為準(zhǔn)
  • 品牌 烜雅生物
  • 型號
  • 廠商性質(zhì) 生產(chǎn)商
  • 所在地 上海市
屬性

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更新時間:2025-04-21 09:16:15瀏覽次數(shù):41評價

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供貨周期 現(xiàn)貨 規(guī)格 200次
貨號 XY-D-1623 應(yīng)用領(lǐng)域 化工,生物產(chǎn)業(yè)
主要用途 科研 英文名稱 /
保存條件 常溫 有效期 12個月
酵母化學(xué)感受態(tài)細(xì)胞制備試劑盒主要用于釀酒酵母 S. cerevisiae,也適用于其他多種實(shí)驗(yàn)用酵母菌株,包括
S. pombe、C. albicans、Pichia pastoris 等。

產(chǎn)品簡介:

本酵母化學(xué)感受態(tài)細(xì)胞制備試劑是一種通過化學(xué)處理,高效快速制備釀酒酵母化學(xué)感受態(tài)細(xì)胞,用于長期凍存以備后續(xù)轉(zhuǎn)化的產(chǎn)品。


產(chǎn)品特點(diǎn):

1.一次制備,-80℃保存,多次使用,免去每次轉(zhuǎn)化都要制備釀酒酵母感受態(tài)細(xì)胞。

2.操作簡單,單溶液制備,除酵母培養(yǎng)的時間外,整個操作只需要 30 分鐘

3.主要用于釀酒酵母 S. cerevisiae,也適用于其他多種實(shí)驗(yàn)用酵母菌株,包括

S. pombe、C. albicans、Pichia pastoris 等。

4.受體酵母可以不含質(zhì)粒,也可用于攜帶有選擇性質(zhì)粒的酵母(如雙雜交體系中的酵母)。

5.對釀酒酵母,最高轉(zhuǎn)化效率可達(dá)到 0.2-1×105 個轉(zhuǎn)化子/ug 質(zhì)粒 DNA。對其他酵母,效率稍低,范圍在 100-2000 個轉(zhuǎn)化子/ug 質(zhì)粒 DNA。

6.得到的感受態(tài)細(xì)胞可以用各種線性或環(huán)狀酵母穿梭質(zhì)粒 DNA 進(jìn)行轉(zhuǎn)化,例如

YIp, YRp, YCp, YEp 和 YAC 等。

7.可以用于酵母雙雜交、定點(diǎn)突變(Site-Directed Mutagenesis)、基因破壞

(Gene Disruption)、等位突變基因修復(fù)(Mutant Allele Recovery)等實(shí)驗(yàn)。

8.酵母化學(xué)感受態(tài)細(xì)胞制備試劑盒可以制備 20 只酵母感受態(tài)細(xì)胞(需要 200mL 酵母培養(yǎng)液),并還帶高效轉(zhuǎn)化液。


產(chǎn)品參數(shù):

產(chǎn)品規(guī)格

成分規(guī)格包裝
PEG Solution50 mL60 mL 本色瓶
Carrier RNA1 mL*22.0 mL 白蓋管
使用手冊1 份

保存和運(yùn)輸

常溫運(yùn)輸和保存,有效期一年。

自備試劑

YPD 培養(yǎng)基


使用方法:

一:酵母化學(xué)感受態(tài)細(xì)胞的制備

說明:按本方法制備 1 管酵母化學(xué)感受態(tài)細(xì)胞就需要 OD600 達(dá)到 0.6-1.0 的新鮮酵母培養(yǎng)液 10 mL,用戶需根據(jù)所需酵母感受態(tài)細(xì)胞的數(shù)量決定培養(yǎng)細(xì)胞的體積。

如果超過 10 mL,則制備液的使用量需要按比例增加。

1.挑取酵母受體菌的新鮮的單菌落(4℃放置不超過 3 周的也可以),接種到裝在 50mL 離心管中的 10 mL 的自備的 YPD 培養(yǎng)基中。

2.30℃搖晃培養(yǎng),搖床速度 250 rpm/分鐘,直到 OD600 達(dá)到 0.6-1.0(相當(dāng)于 0.6-1×107 細(xì)胞/mL)。

3.室溫 3000 rpm 離心 5 min,棄上清得酵母細(xì)胞沉淀。

4.新鮮制備適量的酵母感受態(tài)制備工作液。對 10 mL 酵母需要 5.25 mL 的工作液,其配制方法是:將 4.75 mL 酵母化學(xué)感受態(tài)制備液A、0.25 mL 酵母化學(xué)感受態(tài)制備液 B 和 0.25 mL 酵母化學(xué)感受態(tài)制備液 C 加入到一個無菌的離心管中后充分震蕩混勻即可。酵母感受態(tài)制備工作液可放室溫待用。

5.用 0.5 倍體積的新鮮配制的酵母感受態(tài)制備工作液洗滌酵母細(xì)胞沉淀一次

(對 10 mL 酵母則需要 5 mL 酵母感受態(tài)制備工作液)。即混合后振蕩 1

分鐘,室溫 3000rpm 離心 3 分鐘,去上清得洗滌后的酵母細(xì)胞沉淀。

6.再用 0.02 倍體積的酵母感受態(tài)制備工作液充分重懸菌體(對10 mL 酵母, 則需要 0.2 mL 酵母感受態(tài)制備工作液)。

7.按每管 0.2 mL 分裝到冷凍管中,放入保溫冰盒中冷卻半小時后再放入

-80℃冰箱待用。0.2 mL 的感受態(tài)細(xì)胞足夠 1 次轉(zhuǎn)化使用。注意:放入保溫冰盒的目的是使溫度緩慢下降,急凍將使轉(zhuǎn)化效率降低,這點(diǎn)跟大腸桿菌感受態(tài)制備過程不同。

二:化學(xué)轉(zhuǎn)化酵母感受態(tài)細(xì)胞

1.將總體積不超過20 uL的0.1-5 ug 質(zhì)粒DNA加到剛從-80℃冰箱取出的、還處于凝固狀態(tài)的 0.2 mL 酵母感受態(tài)細(xì)胞上。注意:最好同時做一個不加質(zhì)粒 DNA 的陰性對照組。

2.室溫充分振蕩直到凝固的感受態(tài)細(xì)胞完-全融化。注意:此步非常關(guān)鍵,如果能在恒溫振蕩器上 37℃振蕩 5 分鐘,則效果更好。

3.加入 1.4mL 酵母化學(xué)感受態(tài)轉(zhuǎn)化液A,輕柔顛倒混勻一分鐘。

4.30℃培養(yǎng) 1 小時。

5.室溫 3000g 離心 5 分鐘,棄上清。

6.在酵母細(xì)胞沉淀中加 1.0 mL 酵母化學(xué)感受態(tài)轉(zhuǎn)化液 B,振蕩一分鐘。

7.室溫 3000g 離心 5 分鐘,棄上清。

8.在酵母沉淀細(xì)胞中加入適量(如 100 uL)的酵母化學(xué)感受態(tài)轉(zhuǎn)化液 B, 混勻后在在選擇培養(yǎng)基上全部涂盤。

9.30℃培養(yǎng) 3-5 天后即得酵母轉(zhuǎn)化菌落。

選擇我們的酵母化學(xué)感受態(tài)細(xì)胞制備試劑盒,就是選擇精準(zhǔn)、高效、可靠的檢測方案,為您的科研實(shí)驗(yàn)保駕護(hù)航!

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