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目錄:上海烜雅生物科技有限公司>>分子生物學(xué)試劑>>試劑盒>> MBP 麥芽糖結(jié)合蛋白純化試劑盒

MBP 麥芽糖結(jié)合蛋白純化試劑盒
  • MBP 麥芽糖結(jié)合蛋白純化試劑盒
參考價 1190
訂貨量 ≥1
具體成交價以合同協(xié)議為準
1190
≥1
具體成交價以合同協(xié)議為準
  • 品牌 烜雅生物
  • 型號
  • 廠商性質(zhì) 生產(chǎn)商
  • 所在地 上海市
屬性

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更新時間:2025-04-23 10:18:50瀏覽次數(shù):55評價

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供貨周期 現(xiàn)貨 規(guī)格 20次
貨號 XY-D-1710 應(yīng)用領(lǐng)域 化工,生物產(chǎn)業(yè)
主要用途 科研 英文名稱 Maltose Binding Protein Purification Kit
保存條件 常溫 有效期 12個月
MBP 麥芽糖結(jié)合蛋白純化試劑盒可 20 次制備,但介質(zhì)可反復(fù)使用更多次(需要復(fù)活),只能用于科研。

產(chǎn)品簡介:

MBP(麥芽糖結(jié)合蛋白,Maltose Binding Protein)標簽蛋白大小為 40 kDa,由大腸桿菌 K12 的 malE 基因編碼。MBP 可增加在細菌中過量表達的融合蛋白的溶解性,尤其是真核蛋白。如果蛋白在細菌中表達,MBP 可以融合在蛋白的 N 端或 C 端。MBP 融合蛋白可通過交聯(lián)淀粉親和層析一步純化,結(jié)合的融合蛋白可用 10 mM 麥芽糖在生理緩沖液中進行洗脫。如果要去除 MBP 融合部分,可用位點特異性蛋白酶切除。可用 MBP 抗體或表達的目的蛋白特異性抗體檢測 MBP 標簽標記的重組蛋白。由于 MBP 融合蛋白原核表達載體具有表達效率高,易于純化等優(yōu)點。在現(xiàn)代分子克隆中 MBP 常作為融合蛋白被廣泛應(yīng)用。本產(chǎn)品就是專門用于分離純化 MBP 融合蛋白的試劑盒。


產(chǎn)品特點:

1.一站式套裝,含所需直鏈淀粉和瓊脂糖介質(zhì)、溶液和層析柱,操作非常方便。

2.提供 2 mL 直鏈淀粉-瓊脂糖介質(zhì),最大載量為 10 mg MBP 蛋白/mL 介質(zhì)。

3.采用麥芽糖溫和洗脫,無去污劑和變性劑對蛋白活性的影響。

4.MBP 麥芽糖結(jié)合蛋白純化試劑盒可 20 次制備,但介質(zhì)可反復(fù)使用更多次(需要復(fù)活),只能用于科研。


產(chǎn)品參數(shù):

成分規(guī)格包裝

直鏈淀粉-瓊脂糖介質(zhì)2 mL5 mL 本色瓶

1 M Tris-HCl(pH7.4)25 mL30 mL 本色瓶

0.1 M EDTA 溶液25 mL30 mL 本色瓶

2 M NaCl 溶液 50 mL60 mL 本色瓶

蔗糖20 g30 mL 本色瓶

PMSF(10 mg/mL)1 mL2.0 mL 白蓋管

0.1 mM 氯化鎂溶液50 mL60 mL 本色瓶

0.1 M 麥芽糖溶液25 mL30 mL 本色瓶

層析柱(6 mL)1 支1 袋

使用手冊1 份

運輸及保存

常溫運輸和保存,但介質(zhì)需 4℃保存,PMSF 需要-20℃保存,有效期一年。

自備試劑

去離子水、20%乙醇、0.22 ?m 或 0.45 ?m 濾膜、自備透析袋(規(guī)格需小于

MBP 麥芽糖結(jié)合蛋白分子量)


使用方法:

1.將直鏈淀粉-瓊脂糖介質(zhì)充分混勻后,取適量加入到預(yù)放了一片篩板的層析柱中(介質(zhì)用量需要根據(jù) MBP 蛋白產(chǎn)量決定,其最大載量為 10 mg MBP 蛋白/mL 介質(zhì),請根據(jù)實驗需要取適量的介質(zhì)加入層析柱中)。

2.用 5 倍柱體積(柱體積指的是填料介質(zhì)的體積,下同,本試劑盒介質(zhì)的體積是 2mL)自備去離子水洗柱,共 3 次。

3.用 5 倍柱體積(約 10 mL)的新配的結(jié)合緩沖液洗柱,進行平衡,使填料介質(zhì)處于與目的蛋白相同的緩沖體系下,起到保護蛋白的作用。結(jié)合緩沖液的配方如下(以 10 mL 為例):

4.4℃ 5000 g 離心 10 分鐘收集 20 mL 表達菌液,棄上清,將細胞沉淀(約100 mg)懸于 2 mL 冰冷的現(xiàn)配的細胞洗滌液中,4℃ 5000 g 離心 15 分鐘收集細胞沉淀后,再次懸于 2 mL 冰冷的細胞洗滌液中。(最好用不加誘導(dǎo)物的菌液做對照樣。)細胞洗滌液的配方如下(以 10 mL 為例):

5.制備細胞裂解物:

1)如果所用載體不帶 MBP 信號肽序列(如pMAL-c2)

a)超聲破碎細胞,功率 30 W,保持細胞低溫(0℃),直到在顯微鏡下看見絕大多數(shù)細胞破裂。(超聲參數(shù)需根據(jù)儀器型號自行摸索, 但裂解物必須不粘稠,否則會堵塞層析柱。)

b)為使溶液澄清,向上述細胞洗滌液中加 35 ?L PMSF(10 mg/mL)。

c)4℃下 13000-15000 g 離心 30 分鐘,以去除殘留細胞和細胞碎片以防堵柱,收集上清樣品,留樣做 SDS-PAGE 電泳對照,其余樣品用于純化 MBP 融合蛋白,直接進入第 6 步。

2)如果所用載體帶 MBP 信號肽序列(如pMAL-p2)

a)4℃ 5000 g 離心 15 分鐘收集細胞,沉淀懸于 1 mL 冰冷的現(xiàn)配的細胞裂解液中。細胞裂解液的配方如下(以 10 mL 為例):

b)加入 25 ?L PMSF(10 mg/mL),室溫攪動 15 分鐘,于 4℃ 13000-15000 g 離心 10 分鐘收集細胞。

c)旋動細胞沉淀,加入 2 mL 冰冷的 0.1 mM MgCl2 溶液,4℃攪動10 分鐘。

d) 休克細胞 4℃ 13000-15000 g 離心 10 分鐘,在上清中加入 10

mM Tris-HCl(pH 7.4)(可將 1 M Tris-HCl,pH 7.4 稀釋 100

倍配制而成)至 pH 為 7.4。

e)上清用 0.22 ?m 水溶性濾膜過濾,濾液用 100 倍體積的 10 mM Tris-HCl(pH 7.4)(配方如上)使用自備透析袋 4℃透析,注:透析袋孔徑需根據(jù)蛋白大小決定,孔徑不得大于融合蛋白大小。

f)收集透析后樣品,留樣做 SDS-PAGE 電泳對照,其余樣品用于純化 MBP 融合蛋白,直接進入第 6 步。

5.將樣品加到平衡好的直鏈淀粉-瓊脂糖介質(zhì)中,4℃搖床孵育至少 1 h(保證目的蛋白與介質(zhì)充分接觸,以提高目的蛋白的回收率),收集流出液。

6.用 10-15 倍柱體積的結(jié)合緩沖液(配方見上表)進行清洗,去除非特異性吸附的雜蛋白,收集洗雜液。

7.使用 5-10 倍柱體積的現(xiàn)配的麥芽糖洗脫液洗脫結(jié)合的融合蛋白,收集洗脫

液(即目的蛋白組分)。麥芽糖洗脫液的配方如下(以 10 mL 為例): 成分用量在麥芽糖洗脫液中的濃度

1 M Tris-HCl(pH 7.4)0.2 mL20 mM

0.1 M EDTA 溶液0.1 mL1 mM

0.1 M 麥芽糖溶液1 mL10 mM

自備去離子水8.7 mL-

8.將純化得到的樣品(包括流出液、洗雜液和洗脫液)以及原始樣品使用

SDS-PAGE 檢測純化效果。

9.填料介質(zhì)清洗:依次使用 3 倍柱體積結(jié)合緩沖液和 5 倍柱體積去離子水平衡介質(zhì),最后再用5 倍柱體積的20%的乙醇平衡,然后保存在等體積的20% 的乙醇中,置于 4℃保存,防止填料被細菌污染。本介質(zhì)可重復(fù)使用。

10.蛋白酶切割釋放靶蛋白(可選步驟,所用試劑需自備):用適當?shù)牡鞍酌盖懈钊诤系鞍揍尫虐械鞍住?/p>

1)加入自備的凝血-酶、腸激酶或 Xa 因子(根據(jù)融合蛋白中的位點選擇)。每毫升介質(zhì)中加入 50 單位的溶于 1 mL PBS 溶液的蛋白酶。顛倒離心管數(shù)次混勻,室溫下振蕩 2-16 小時。

2)4℃以 500 g 離心 5 分鐘,上清小心轉(zhuǎn)移到新離心管中。

3)用傳統(tǒng)的層析方法或 SDS-PAGE 電泳分離靶蛋白和蛋白酶。

選擇我們的MBP 麥芽糖結(jié)合蛋白純化試劑盒,就是選擇精準、高效、可靠的檢測方案,為您的科研實驗保駕護航!

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