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產(chǎn)品簡介：

本產(chǎn)品是基于DNA環(huán)化技術(shù)和MDA技術(shù)、用于從單細胞（或數(shù)個細胞）中制備和擴增全基因組的試劑盒。

產(chǎn)品特點：

1.即開即用，不需要單獨準備和優(yōu)化所需試劑。

2.可以擴增單個細胞的基因組達上萬倍。

3.具有全基因組擴增的所有特點，包括高產(chǎn)量和高保真性。

4.可使用各種來源的樣品，包括培養(yǎng)細胞和胚胎細胞等。

5.產(chǎn)物可用于多種后續(xù)試驗，包括多重PCR、長片端PCR、定量PCR、克隆、文庫構(gòu)建、單倍型分析、測序、基因芯片分析、各種遺傳分析（片段差異，微衛(wèi)星差異、SNP、STR）等。

6.單細胞全基因組擴增試劑盒(MDA熒光染料法)足夠30 次微量擴增。

產(chǎn)品參數(shù)：

成份規(guī)格包裝

單細胞裂解液(擴增專用)100 μL0.5 mL 本色蓋

單細胞 MDA 擴增溶液 A30 μL0.5 mL 藍色蓋

MDA 專用隨機引物溶液60 μL0.5 mL 白色蓋

20×飽和染料30 μL0.5 mL 棕色管

10×DNA 環(huán)化-擴增緩沖液50 μL0.5 mL 綠色蓋

dNTP（25mM）30 μL0.5 mL 黃色蓋

DNA 環(huán)化酶A15 μL0.5 mL 紫色蓋

DNA 環(huán)化酶B15 μL0.5 mL 橙色蓋

Phi 29 DNA 聚合酶（10U/μL）15 μL0.5 mL 紅色蓋

使用手冊1 份無

運輸及保存

低溫運輸、-20℃保存，有效期一年。

自備試劑

超純水,重懸細胞緩沖液

使用方法：

1如果有 N 個樣本，則標記 N+1 個 0.2 mL 的PCR 管，在每個管中加入 2.5 μL 單細胞裂解液（擴增專用）。多出的一個管標為無模板對照管。

2將細胞懸浮在自備的 PBS 緩沖液或其他合適的緩沖液中，在顯微鏡下用毛細管轉(zhuǎn)移單個細胞（或數(shù)個細胞，總體積不超過 2.5 μL）到上步準備的管中。在無模板對照管中不加入細胞，只加入 2.5 μL 重懸細胞所用的緩沖液。

3室溫放置 10 分鐘裂解細胞，所得裂解液為單細胞裂解液。

1.   在上步的 5 μL 單細胞裂解液中按下表加入各成分：

成分N 個樣本管無模板對照管

超純水4.5 μL4.5 μL

DNA 環(huán)化酶A0.5 μL0.5 μL

在 PCR 儀器上 37℃ 2 小時，65℃ 20 分鐘，95℃ 5 分鐘，

待溫度下降到 30°C 左右加入

10×DNA 環(huán)化-擴增緩沖液0.5 μL0.5 μL

單細胞 MDA 溶液 A1 μL1 μL

DNA 環(huán)化酶B0.5 μL0.5 μL

超純水3 μL3 μL

在 PCR 儀器上 65℃ 1 小時，85℃ 10 分鐘后加入

10×DNA 環(huán)化-擴增緩沖液0.5 μL0.5 μL

MDA 專用隨機引物溶液2 μL2 μL

20×飽和染料1 μL1 μL

dNTP（25mM）1 μL1 μL

在 PCR 儀器上 95℃ 5 分鐘，自然冷卻到室溫后加入

phi29 DNA 聚合酶，10U/μL0.5 μL0.5 μL

合計20 μL20 μL

430℃保溫 12 小時。最好使用 PCR 儀進行 30℃保溫（注意：不是 37℃）并打開熱蓋保溫。每 10 分鐘設(shè)置成一個循環(huán)，采集一次 SYBR 通道的熒光信號。由于是可以實時檢測反應，所以反應不一定要在設(shè)置時間到達后結(jié)束，可以在擴增曲線進入平臺期后（已經(jīng)沒有新的 DNA 合成）結(jié)束。

565℃保溫 10 分鐘使phi29 DNA 聚合酶滅活。注：由于 phi29 DNA 聚合酶有DNA

外切活性，所以最好將其滅活以免干擾后續(xù)反應。

6典型實驗結(jié)果。有擴增的樣本將有平緩的 S 熒光曲線，無模板對照將沒有此標準擴增曲線（見下圖）或擴增曲線：

若采用 30℃金屬浴或水浴，必須在樣品管中加入 50μL 石蠟油以防水分蒸發(fā)，使用電泳檢測或PCR 檢測是否有擴增。

7擴增所得 DNA 可以用于后續(xù)實驗。

選擇我們的單細胞全基因組擴增試劑盒(MDA熒光染料法)，就是選擇精準、高效、可靠的檢測方案，為您的科研實驗保駕護航！