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產(chǎn)品簡介：

真核生物 mRNA 5’端的帽結(jié)構(gòu)為mRNA 的穩(wěn)定、轉(zhuǎn)運和翻譯所需，但體外轉(zhuǎn)錄制備得到的 RNA 并沒有帽結(jié)構(gòu)。為了提高這些 RNA 在體外翻譯、轉(zhuǎn)染和微注射應(yīng)用的穩(wěn)定性，很有必要為其加上 Cap0 帽結(jié)構(gòu)（m7GpppN 帽結(jié)構(gòu)或m7G 帽結(jié)構(gòu)）。雖然 Cap0 RNA 可以細(xì)胞內(nèi)被有效的翻譯成蛋白質(zhì)，但在體內(nèi)

（而不是細(xì)胞內(nèi)）使用時會引起免疫反應(yīng)，而 Cap1 RNA 可以逃逸免疫反應(yīng)。因此很多時候需要制備 Cap1 RNA。Cap1 帽結(jié)構(gòu)由 Cap0 帽結(jié)構(gòu)甲基化而得。本產(chǎn)品是專門用于為無帽RNA 分子加上Cap1 帽結(jié)構(gòu)的試劑盒。此加帽過程由RNA triphosphatase, guanylyltransferase、guanine methyltransferase、 m7GpppN 甲基化酶四個酶催化的連貫反應(yīng)組成，其示意圖如下：

產(chǎn)品特點：

1.即開即用，用戶只需提供無帽 RNA 即可。

2.加帽效率高，接近 9%。

3.本試劑盒足夠 40 次 20μL 體系的無帽 RNA 加 Cap0-Cap1 帽反應(yīng)，每次可以處理多達 10μg 的無帽RNA。

4.本試劑盒也可以用于無帽RNA 加 Cap0，只是在設(shè)置反應(yīng)時不加 RNA Cap0

甲基化酶。

5.所得 Cap1 RNA 經(jīng)過純化后可以直接用于后續(xù)實驗。也可以不經(jīng)過純化用于

polyA 加尾反應(yīng)。

6. RNA 加 Cap0 和 Cap1 試劑盒只能用于科研。

產(chǎn)品參數(shù)：

成份 規(guī)格包裝

RNA 加 Cap0 反應(yīng)液 A 80 μL0.5mL 綠蓋管

RNA 加 Cap0 反應(yīng)液 B 40 μL0.5mL 黃蓋管

RNA 加 Cap0 反應(yīng)液 C 40 μL0.5mL 藍蓋管

RNA 加 Cap0 酶，10U/μL 40 μL0.5mL 紅蓋管

RNA Cap0 甲基化酶，50U/μL 40 μL0.5mL 紅蓋管

使用手冊 1 份無

運輸及保存

低溫運輸，-20℃保存、有效期一年。

自備試劑

超純水、體外轉(zhuǎn)錄試劑盒，RNA 純化試劑盒

使用方法：

一、體外轉(zhuǎn)錄制備 RNA 模板（本試劑盒不含所需試劑）

1.用自備的體外轉(zhuǎn)錄劑盒制備 RNA 模板。

2.純化 RNA 并測定其濃度。純化的 RNA 需要溶解在 RNase-free 水中。二、加帽反應(yīng)

3.在一個RNase-free 離心管中，加入10μg 的純化的無帽RNA，補RNase-free水到 14μL。

4.65℃變性 10 分鐘后，放冰上待用。變性能打開可能空間阻礙酶接觸 RNA 末端的二級結(jié)構(gòu)，非常重要。如果加帽效果不好，還可以提高溫度到 75℃和85℃變性 10 分鐘。

5.再在另外一個 RNase-free 離心管中加入下列成分：

成分加入量

RNA 加 Cap0 反應(yīng)液 A2 μL

RNA 加 Cap0 反應(yīng)液 B1 μL

RNA 加 Cap0 反應(yīng)液 C1 μL

RNA 加 Cap0 酶，10U/μL1 μL

RNA Cap0 甲基化酶，40U/μL1 μL

6.最后將冰上放置的 14μL 無帽 RNA 加入并輕柔吹打混勻。

7.37℃保溫 2 小時。

8.  得到的 Cap1 RNA 可以不經(jīng)過純化直接用于 polyA 加尾。也可以純化后用于各種后續(xù)實驗。如果在設(shè)置反應(yīng)時不加 RNA Cap0 甲基化酶，則得到的RNA 是 Cap0 RNA。

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