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目錄:上海烜雅生物科技有限公司>>分子生物學(xué)試劑>>試劑盒>> 一站式蛋白質(zhì)非變性PAGE電泳試劑盒(高pH)

一站式蛋白質(zhì)非變性PAGE電泳試劑盒(高pH)
  • 一站式蛋白質(zhì)非變性PAGE電泳試劑盒(高pH)
參考價(jià) 1290
訂貨量 ≥1
具體成交價(jià)以合同協(xié)議為準(zhǔn)
1290
≥1
具體成交價(jià)以合同協(xié)議為準(zhǔn)
  • 品牌 烜雅生物
  • 型號(hào)
  • 廠商性質(zhì) 生產(chǎn)商
  • 所在地 上海市
屬性

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更新時(shí)間:2025-04-29 14:19:05瀏覽次數(shù):53評(píng)價(jià)

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供貨周期 現(xiàn)貨 規(guī)格 30次
貨號(hào) XY-D-1897 應(yīng)用領(lǐng)域 化工,生物產(chǎn)業(yè)
主要用途 科研 英文名稱 One-Stop Protein Native PAGE Kit (High pH)
保存條件 -2℃ 有效期 1年
一站式蛋白質(zhì)非變性PAGE電泳試劑盒(高pH)即開即用,用戶不需單獨(dú)準(zhǔn)備各種成分,十分方便。

產(chǎn)品簡(jiǎn)介:

非變性聚丙烯酰胺凝膠電泳(Native PAGE)是目前電泳法分離活性蛋白的主要方法之一,跟 SDS-PAGE 根據(jù)分子量大小分離蛋白質(zhì)不同,它主要根據(jù)蛋白質(zhì)的 pI 分離蛋白質(zhì)。由于蛋白質(zhì)的 pI 各不相同,所以對(duì)不同靶蛋白質(zhì)需要選用具有不同 pH 的電泳體系。單獨(dú)配制不同 pH 的 Native PAGE 電泳膠十分繁瑣,為此本公司開發(fā)了本產(chǎn)品。


產(chǎn)品特點(diǎn):

1.即開即用,用戶不需單獨(dú)準(zhǔn)備各種成分,十分方便。

2.非變性,電泳過程中蛋白質(zhì)保持天然的構(gòu)象和亞基之間的相互作用,得到的蛋白質(zhì)一般都具有生物活性(而 SDS-PAGE 得到的蛋白沒有活性)。

3.可以用于分析蛋白質(zhì)和 DNA 或 RNA 的相互作用、蛋白修飾、蛋白構(gòu)型改變、回收有活性蛋白質(zhì)等試驗(yàn)。

4.電泳后可直接用于考染、銀染、Western 雜交等實(shí)驗(yàn)。

5.本產(chǎn)品足夠 30 次mini PAGE 電泳。

6.一站式蛋白質(zhì)非變性PAGE電泳試劑盒(高pH)只能用于科研。


產(chǎn)品參數(shù):

成份規(guī)格包裝

丙烯酰胺干粉60 g250 mL 棕塑瓶

甲叉雙丙烯酰胺干粉3 g5 mL 本色瓶

TEMEDCAS:110-18-91.5 mL1.5 mL 棕色管

過硫酸銨干粉CAS:7727-54-01 g1.5 mL 白蓋管

4×高 pH 濃縮膠配膠液pH 6.7100 mL125 mL 本色瓶

4×高 pH 分離膠配膠液pH 8.9200 mL250 mL 本色瓶

高 pH 電泳液pH 8.3(干粉)10 L500 mL 本色瓶

5×高 pH 上樣液1 mL1.5 mL 棕色管

使用手冊(cè)1 份1 份

運(yùn)輸及保存

常溫運(yùn)輸和保存,5×高 pH 上樣液需低溫運(yùn)輸、-20℃保存,保存期為一年。

自備試劑

去離子水、天然 PAGE 蛋白質(zhì)標(biāo)準(zhǔn)或蛋白質(zhì)等電電泳標(biāo)準(zhǔn)品。


使用方法:

一:配制分離膠

1.確定濃度。對(duì)分子量在 100 kD 以上的蛋白質(zhì),可選用 3-5%的膠;對(duì)分子量在20-150 kD 之間的蛋白質(zhì),可選用 5-10%的膠;對(duì)分子量在 10-80 kD 之間的蛋白質(zhì),可選用 10-15%的膠。對(duì)未知樣品,建議使用 7.5%的膠。

2.配制 10%的APS(過硫酸銨):按每 0.1 克過硫酸銨干粉加 1 mL 去離子水的比

例配制 10%的 APS 溶液,該溶液可以在 4℃存放一周。

 

3.配制 30%丙烯酰胺-甲叉雙丙烯酰胺(19:1)溶液:在本產(chǎn)品提供的裝有 60 克丙烯酰胺干粉的塑料瓶中加入 146 mL 自備的去離子水和 3 g 甲叉雙丙烯酰胺,充分搖晃直到溶解(約需 10-20 分鐘)即得 200 mL 30%丙烯酰胺(19:1)溶液。此溶液最好在一個(gè)月內(nèi)用完,必須 4℃避光保存。

4.配 10 mL 分離膠(如果配制其他體積,請(qǐng)按比例調(diào)節(jié)各成分用量):在一個(gè) 25 mL 的三角瓶中,先加入 4.2 mL 去離子水、3.3 mL 30%丙烯酰胺-甲叉雙丙烯酰胺(19: 1)溶液和 2.5 mL 4×分離膠配膠液。

5.搖晃混勻后抽真空 10-15 分鐘以去除溶液中的氧氣(氧氣能抑制丙烯酰胺聚合反應(yīng),不去除的話將影響丙烯酰胺聚合反應(yīng))。

6.加入 50 μL 新配制的 10%APS 和 10 μL TEMED(這是配制 10 mL 膠的用量,配制更大體積的膠則按比例增加),迅速搖勻后倒膠。

7.在膠面距離頂部 1-1.5 cm 的時(shí)候停止灌膠。然后覆蓋一層 1-5 mm 厚的水,使膠頂部液面平整。由于比重不同,水和丙烯酰胺溶液不會(huì)混合。

8.室溫聚合 30-60 分鐘后,用 1×分離膠配膠液洗滌凝固的膠的頂部,待用。

二:配制濃縮膠(濃縮膠可以提高分辨率,適合于成分復(fù)雜的樣品,一般使用濃度為4%。使用濃縮膠時(shí)蛋白質(zhì)泳動(dòng)速度主要跟其尺寸和形狀相關(guān)。因濃縮膠 pH 跟分離膠pH 不同,蛋白質(zhì)可能會(huì)發(fā)生聚合和沉淀。對(duì)成分單一的樣品,可以不用濃縮膠,此時(shí)蛋白的泳動(dòng)速度主要跟其電荷密度,尺寸和形狀相關(guān)。

9.配 10 mL 濃縮膠(如果配制其他體積,請(qǐng)按比例調(diào)節(jié)各成分用量): 在一個(gè) 25 mL 的三角瓶中,先加入 6.2 mL 去離子水、1.3 mL 30%丙烯酰胺-甲叉雙丙烯酰胺(19: 1)溶液和 2.5 mL 4×濃縮配膠液。

10.搖晃混勻后抽真空 10-15 分鐘以去除溶液中的氧氣(氧氣能抑制丙烯酰胺聚合反應(yīng),不去除將影響丙烯酰胺聚合反應(yīng))。

11.按上表用量加入 50 μL 10%APS 和 15 μL TEMED(這是配制 10 mL 膠的用量,配制更大體積的膠則用量需按比例增加),迅速搖勻后在已經(jīng)凝固的分離膠上倒膠。

12.在液面達(dá)到頂部時(shí)停止灌膠,插入梳子。

13.室溫聚合 30-60 分鐘,拔出梳子,用 1×電泳液沖洗加樣孔。三:電泳

14.將凝膠板固定在電泳裝置上,往上槽和下槽加入足夠 1×電泳液。注:本產(chǎn)品提供

10 升電泳液,用前需將所有干粉溶解在 1 L 水中得 10×電泳液(注:需要 65℃ 加熱),可以室溫放置,用時(shí)再稀釋成 1×電泳液。一般不需要再調(diào)節(jié) pH,但保險(xiǎn)起見,可以用 pH 試紙測(cè)試一下 1×電泳液。高pH 電泳緩沖液的pH 是 8.3。

15.連接電極。如果濃縮膠和分離膠的 pH 高于靶蛋白pI,靶蛋白將帶負(fù)電荷并向陽極

移動(dòng),可以按標(biāo)準(zhǔn)的 SDS-PAGE 方法接通電極(上陰極下陽極);如果濃縮膠和分離膠 pH 低于靶蛋白pI,靶蛋白將帶正電荷并向陰級(jí)移動(dòng),此時(shí)應(yīng)該下陰極上陽極。

16.300 V 預(yù)電泳直到電流不再降低(約需要 30 分鐘)以去除殘留過硫酸銨。

17.換電泳液。

18.在液體蛋白質(zhì)樣品中加入 5×上樣液(16 μL 液體樣品加 4μL 上樣液)后上樣。

0.75 mm 厚的膠可以上 10 μL,1.5 mm 厚的膠可以上 20 μL。在未用加樣孔中也要加 1×上樣液以防有樣品的空道的樣品擴(kuò)散。注意:如果用考染檢測(cè),每個(gè)孔的蛋白最好在 50-100 μg 總蛋白,如果銀染則只需要 1 μg 即可。樣品如果是蛋白質(zhì)沉淀,可用 1×上樣液直接溶解蛋白質(zhì)沉淀后再上樣。蛋白質(zhì)溶液或沉淀中不能含有能夠改變上樣液 pH 的殘留成分(如蛋白質(zhì)沉淀劑 TCA),用前最好用 pH 試紙測(cè)試一下,不在上樣液的 pH 范圍時(shí)就用酸或堿調(diào)到正常范圍。大量樣品可用透析法調(diào) pH。

19.上樣自備的天然 PAGE 蛋白質(zhì)標(biāo)準(zhǔn)或等電電泳的標(biāo)準(zhǔn)品(如果有的話)。

20.用 15 mA(對(duì) 0.75 mm 厚的膠)或 30 mM(對(duì) 1.5 mm 厚的膠)的電流電泳直

到染料移動(dòng)到分離膠底部。微型膠一般需要 1-2 小時(shí)。注意:電泳過程最好在冷室或有冷卻系統(tǒng),以免電泳產(chǎn)熱使蛋白質(zhì)變性。

選擇我們的一站式蛋白質(zhì)非變性PAGE電泳試劑盒(高pH),就是選擇精準(zhǔn)、高效、可靠的檢測(cè)方案,為您的科研實(shí)驗(yàn)保駕護(hù)航!

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