果實/種子總 RNA 提取試劑盒

Fruit / Seed Total RNA Mini Kit

果實/種子總RNA快速提取試劑盒 核酸提取 

目錄號：91513

產(chǎn)品內(nèi)容

保存條件

室溫（15 ~ 25℃），有效期 12 個月。

自備試劑

無水乙醇，β-巰基乙醇

產(chǎn)品簡介

適用于快速提取果實、種子、中草藥的總 RNA，gDNA 過濾器能高效濾除 gDNA， RNA 可直接用于 RT、RT-PCR、RT-qPCR、普通轉(zhuǎn)錄組測序、RACE、芯片等。

成功案例：稻谷種子、玉米種子、小麥種子、葡萄果實、板栗、櫻桃、草莓、芒果、百合鱗莖、唐菖蒲的球莖、中草藥的塊根...

如果遇到果實、種子、中草藥，例如：多糖多酚巨高的作物種子（小麥/玉米/大豆/水稻）、葡萄果實、藍(lán)莓果實、百合鱗莖、土豆塊莖；或者次級代謝產(chǎn)物巨豐富的葛根、虎杖、雪蓮等藥用植物，請選擇 91513-果實種子總RNA 提取試劑盒。

產(chǎn)品特點

1. 高質(zhì)：28s/18s=2:1，OD260/280=2.0～2.2！

2. 高效：提取全過程僅需 30min！

注意事項

1. 如果 FSL 有析出或者沉淀，請將其置于 65℃水浴中，重新溶解后使用。

2. 樣品應(yīng)避免反復(fù)凍融，否則會影響 RNA 的提取得率和質(zhì)量。

具體產(chǎn)品的參數(shù)以收到產(chǎn)品說明書的參數(shù)為準(zhǔn)

操作步驟：

重要提示：

① 第一次使用前請先在漂洗液 RW 中加入無水乙醇，加入量詳見瓶身標(biāo)簽。

② 操作前，取1ml裂解液 FSL至2.0ml離心管內(nèi)，加入5%的β-巰基乙醇

（例如：1ml FSL加50μl β-巰基乙醇），顛倒混勻后，65℃水浴中預(yù)熱。多個樣本按比例放大準(zhǔn)備。

③ β-巰基乙醇是裂解液FSL的關(guān)鍵成分，必要的時候可以提高終濃度到10～20%，來防止樣品褐化。如果碰到特別復(fù)雜的植物，可以嘗試在裂解液中再加入PVP40至終濃度2%。

④ 所有離心步驟均需要在室溫（15℃～25℃）下進(jìn)行。

1. 材料處理：

a．將植物樣本在液氮中迅速研磨成細(xì)粉。

b．轉(zhuǎn)移 30～200 mg 細(xì)粉至 65℃預(yù)熱的裂解液 FSL（已加有 β-巰基乙醇）中，立即劇烈渦旋震蕩 30 Sec，充分混勻。

注意：水分多的樣品（如草莓、西瓜果肉）投入 150～200 mg； 水分含量少的樣品（如成熟的小麥/玉米/大豆種子）投入 30～40 mg； 淀粉含量高的塊莖投入 40～80mg；葉片投入 50～100 mg。

c．短暫回放至65℃水浴5min，中間偶爾顛倒1～2次，幫助裂解。

d．將裂解物13,000rpm 離心5 ~10min，沉淀不能裂解的碎片。

e．轉(zhuǎn)移上清（約 800~900μl）至新的2.0ml離心管中，加入0.5倍體積的無水乙醇（約400~450μl），吹打混勻。

2. 每次轉(zhuǎn)移≤750μl上清混合液至gDNA過濾器中（過濾器放入收集管），13,000rpm離心2min，倒棄濾液。重復(fù)此過程，直到混合液全部轉(zhuǎn)入gDNA 過濾器。此時，絕大部分 gDNA 被濾除，RNA和少量gDNA殘留被吸附在膜上。

3. 取出步驟2的gDNA過濾器，放入一個新的2.0ml離心管中，加入500μl 裂解液 ARL，13,000rpm 離心30sec，收集濾液（RNA在濾液中），向濾液中加入250μl無水乙醇，吹打混勻。

4. 將濾液混合物加入RNA吸附柱中，13,000 rpm 離心2 min，倒棄濾液。此時，RNA被吸附在膜上。

5. 加入700μl去蛋白液 RW1，室溫放置1min，13,000 rpm 離心30sec，倒棄濾液。

6. 加入500μl 漂洗液 RW，13,000 rpm 離心 30 sec，倒棄濾液。

7. 重復(fù)步驟6一次。

8. 將RNA吸附柱放回空收集管中，13,000 rpm 離心2 min，除去膜上殘留的乙醇。

9. 取出RNA吸附柱，放入 RNase-free1.5 ml 離心管中，向 RNA 吸附膜的中央懸空滴加 30~50μl的RNase-free H₂O，室溫放置 1 min，13,000 rpm 離心1min。

10. 提取的總RNA，可直接用于下游實驗，或于-70℃保存，以免降解。

相關(guān)產(chǎn)品： 

71118-100 Script III 1st Strand cDNA Synthesis Kit（for PCR or qPCR）

71710-100 Script III All-in-one RT Mix with dsDNase（for qPCR）

71600-500 2x Universal SYBR Green qPCR Mix (適用于所有qPCR儀

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