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紅霉su-N-脫甲基酶試劑盒P450

參  考  價面議
具體成交價以合同協(xié)議為準

產(chǎn)品型號DA6007

品       牌NobleRyder/諾博萊德

廠商性質(zhì)生產(chǎn)商

所  在  地北京市

更新時間:2025-04-11 17:03:17瀏覽次數(shù):98次

聯(lián)系我時,請告知來自 化工儀器網(wǎng)
供貨周期 現(xiàn)貨 規(guī)格 50T/24S
貨號 DA6007 應用領域 環(huán)保,化工,生物產(chǎn)業(yè),農(nóng)林牧漁,制藥/生物制藥
主要用途 具有催化底物形成非活性易于排泄的代謝產(chǎn)物而具有解毒作用
細胞色素P450 酶是一組主要存在于肝臟的酶系,在外源物質(zhì)代謝中,尤其是藥物和毒物的代謝,具有重要作用。ERND 在P450 酶系中相當于CYP2B 亞型,與藥物代謝的去甲基化密切相關。CYP2B 具有催化底物形成非活性易于排泄的代謝產(chǎn)物而具有解毒作用,也可使某些藥物經(jīng)CYP2B 代謝活化。
紅霉su-N-脫甲基酶試劑盒P450

紅霉su-N-脫甲基酶(Erythromycin N-demethylase,ERND)試劑盒說明書

分光光度法 50 管/24

紅霉su-N-脫甲基酶試劑盒P450

正式測定前務必取 2-3 個預期差異較大的樣本做預測定測定意義:

細胞色素P450 酶是一組主要存在于肝臟的酶系,在外源物質(zhì)代謝中,尤其是藥物和毒物的代謝,具有重要作用。ERND P450 酶系中相當于CYP2B 亞型,與藥物代謝的去甲基化密切相關。CYP2B 具有催化底物形成非活性易于排泄的代謝產(chǎn)物而具有解毒作用,也可使某些藥物經(jīng)CYP2B 代謝活化。

測定原理:

ERND 催化紅霉su釋放甲醛,通過 Nash 比色測定甲醛含量,即可計算出 ERND 活性。

組成:

產(chǎn)品名稱

DA6007-50T/24S

Storage

試劑一:粉劑

1  

4℃

試劑二:液體

1  

4℃

試劑三:粉劑

1  

4℃

試劑四:粉劑

1  

4℃

試劑五:液體

1  

4℃

試劑六:液體

1  

4℃

試劑七:液體

1  

4℃

標準液:液體

1  

-20℃

說明書

一份

試劑一:粉劑×1 瓶,4℃保存。臨用前加 50 ml 蒸餾水溶解。

試劑三:粉劑×1 瓶,4℃保存。臨用前加 2.6 ml 蒸餾水,充分溶解。試劑四:粉劑×1 瓶,4℃保存。臨用前加 2.6 ml 蒸餾水,充分溶解。試劑五:粉劑×1 瓶,4℃保存。臨用前,加蒸餾水 9 ml 充分溶解。

標準液:液體×1 瓶,-20℃保存。臨用前取 1.5 ml EP 管,加入 10μl 標準液,加 990μl 蒸餾水,混勻即為0.05 mmol/L 標準甲quan溶液,4℃保存。

自備儀器和用品:

可見分光光度計、普通離心機,超速離心機、可調(diào)式移液槍、1ml 玻璃比色皿、蒸餾水和冰。

粗酶液提?。?/span>

1、除去細胞核,線粒體等大分子物質(zhì):稱約 0.5g 組織,加入 1ml 試劑一,冰上充分研磨,10 000g 4℃離心 30min,取上清液,轉(zhuǎn)入超速離心管中。

2、粗制微粒體:100 000g,4℃,離心 60min,棄上清液。

3、除血紅蛋白等雜質(zhì):向步驟 2 的沉淀中加 1ml 試劑一,蓋緊后充分震蕩溶解,100 000g 離心 30min,棄上清液。

4、最終微粒體:向步驟 3 的沉淀中加試劑二 0.5ml,充分震蕩溶解,即粗酶液,待測。該待測液需當天使用。

測定操作:

分光光度計預熱 30 min 以上,調(diào)節(jié)波長到 412 nm,蒸餾水調(diào)零。

試劑二置于 37℃水浴中預熱 30 min。

對照管:取 1 支EP 管,加入 50μl 粗酶液,850μl 試劑二,50μl 試劑三,50μl 蒸餾水,混勻后置于 37℃水浴保溫 30min;立即加入 175μl 試劑五,混勻后置于冰浴中 5min;取出后加入 175μl 試劑六,混勻后室溫靜置 5min;室溫 8000rpm 離心 5min;取新的EP 管,加入 500μl 上清液,500μl 試劑七,混勻后 60℃水浴 10min,然后取出,用冷水冷卻 5min,于 412nm 測定光吸收,記為A 對照管。

測定管:取 1 支EP 管,加入 50μl 粗酶液,850μl 試劑二,50μl 試劑三,50μl 試劑四,混勻后置于 37℃

水浴保溫 30min;立即加入 175μl 試劑五,混勻后置于冰浴中 5min;取出后加入 175μl 試劑六,混勻后室

溫靜置 5min;室溫 8000rpm 離心 5min;取 1 支新EP 管,加入 500μl 上清液,500μl 試劑七,混勻后 60℃

水浴 10min,然后取出,用冷水冷卻 5min,于 412nm 測定光吸收,記為A 測定管。

標準管:取 1 支EP 管,加入 500μl 標準品,500μl 試劑七,混勻后 60℃水浴 10min,然后取出,用冷水冷卻 5min,于 412nm 測定光吸收,記為A 標準管。

注意:每個樣品都需要做對照管。

ERND 活性計算公式:

(1) 按照蛋白濃度計算:

活性單位定義:37℃下,每分鐘每毫克蛋白催化產(chǎn)生 1nmol 甲醛為 1 個酶活單位。

ERND 活性(nmol/min/mg prot) = C 標準品×V 標準品×(A 測定管-A 對照管)÷A 標準管×稀釋倍數(shù)÷(Cpr×V樣)÷T

= 45×(A 測定管-A 對照管)÷A 標準管÷Cpr。

(2). 按照樣本質(zhì)量計算:

活性單位定義:37℃下,每分鐘每克樣品催化產(chǎn)生 1nmol 甲醛為 1 個酶活單位。

ERND 活性(nmol/min/g 鮮重) = C 標準品×V 標準品×(A 測定管-A 對照管)÷A 標準管×稀釋倍數(shù)÷(W×V樣)÷T

= 45×(A 測定管-A 對照管)÷A 標準管÷W

C 標準品:0.05 mmol/L=50μmol/L;V 標準品:500μl=0.0005 L;稀釋倍數(shù):V 反總÷V 上清液=(50+850+50+50+175+175)÷500=2.7;Cpr:粗酶液蛋白質(zhì)濃度,mg/ml,需要另外測定;V 樣:加入粗酶液體積,50μl=0.05ml;W:樣本質(zhì)量,g;T:催化反應時間,30min。


紅霉su-N-脫甲基酶試劑盒P450

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